MIO nền tảng trung bình, chuẩn bị và sử dụng



các một nửa MIO là một xét nghiệm sinh hóa được sử dụng để giúp xác định các loài vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae. Nó khá bổ dưỡng và bao gồm glucose, chiết xuất men, peptone, triptein, L-ornithine hydrochloride, bromocresol tím và agar.

Ý nghĩa của từ viết tắt của nó (MIO) mô tả từng tham số có thể được quan sát trong phương tiện này; vận động, indole và ornithine. Khả năng di chuyển là khả năng của vi sinh vật di chuyển nhờ sự hiện diện của Flagella. Để quan sát được tính chất này, tính nhất quán của môi trường phải là bán rắn, do đó việc chuẩn bị có lượng thạch ít hơn..

Việc sản xuất indole chứng minh sự có mặt của enzyme tryptophanase hoạt động trên amino acid tryptophan, cần thiết sử dụng thuốc thử tiết lộ để có thể nhìn thấy sản xuất indole.

Cuối cùng, ornithine xác định xem vi khuẩn có khả năng khử carboxyl axit amin hay không, nghĩa là, nếu nó có enzyme orinithine decarboxylase.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Peptone, chiết xuất men và triptein
    • 1.2 Động lực
    • 1.3 Glucose
    • 1,4 L-Ornithine
    • Chỉ số pH 1,5
  • 2 Kỹ thuật gieo hạt và phát triển
  • 3 Chuẩn bị
    • 3,1 MIO vừa
    • 3.2 Thuốc thử Kovacs (nhà phát triển thử nghiệm Indole)
  • 4 Sử dụng
  • 5 Kiểm soát chất lượng
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Peptone, chiết xuất men và triptein

Những yếu tố này góp phần vào sức mạnh dinh dưỡng của phương tiện này. Chúng phục vụ như một nguồn dinh dưỡng và axit amin thiết yếu cho sự phát triển của vi khuẩn.

Ngoài ra, triptein là một nguồn tryptophan để chứng minh sự hiện diện của enzyme tryptophanase, làm suy giảm tryptophan bằng cách khử khử giải phóng indole, axit pyruvic, amoniac và năng lượng.

Indole là không màu, vì vậy sự hiện diện của nó được tiết lộ bằng cách thêm năm giọt thuốc thử Ehrlich hoặc Kovacs, cả hai đều có p-dimethylaminobenzaldehyd.

Nhóm aldehyd của hợp chất này phản ứng với indole, tạo ra sản phẩm màu đỏ fuchsia hình vòng trên bề mặt thạch.

Bất kỳ dấu vết của màu sắc nên được coi là bằng chứng tích cực. Kiểm tra nên được đọc ngay lập tức, bởi vì sau một thời gian màu xuống cấp.

Mặt khác, xét nghiệm này nên được tiết lộ sau khi đã ghi lại kết quả của sự vận động và khử carboxyl của ornithine..

Giải thích

Xét nghiệm dương tính: hình thành một vòng màu đỏ fuchsia khi thêm giọt thuốc thử Kovacs.

Xét nghiệm âm tính: không có sự hình thành vòng.

Động lực

Khả năng di chuyển của vi khuẩn sẽ được chứng minh nếu quan sát thấy môi trường đục hoặc nếu có một dòng tăng trưởng dày mở rộng xung quanh việc tiêm chủng ban đầu.

Một thử nghiệm vận động tiêu cực sẽ được chứng minh bằng cách quan sát một đường tăng trưởng mỏng, và tất cả xung quanh sẽ không có sự tăng trưởng.

Điều quan trọng là độ linh động phải được đọc trước khi tiết lộ indole, vì việc thêm các đám mây thuốc thử vào toàn bộ môi trường.

Ở vi khuẩn di động nhưng phát triển chậm, rất khó để chứng minh khả năng vận động của chúng với phương tiện này. Trong trường hợp này, nên sử dụng các thử nghiệm hoặc phương pháp khác, chẳng hạn như phương tiện vận động hoặc phương pháp thả rơi.

Glucose

Glucose là carbohydrate có thể lên men, ngoài việc cung cấp năng lượng axit hóa môi trường, một điều kiện cần thiết cho quá trình khử carboxyl của axit amin ornithine xảy ra.

Quá trình lên men glucose luôn luôn xảy ra, dựa trên nguyên tắc tất cả các vi khuẩn thuộc họ glucose lên men Enterobacteriaceae.

L-Ornithine

Nếu vi khuẩn sản xuất enzyme ornithine decarboxylase, nó có thể hoạt động một khi môi trường đã bị axit hóa bởi quá trình lên men glucose.

Enzym ornithine decarboxylase hoạt động trên nhóm carboxyl của axit amin tạo ra một amin gọi là putresine kiềm hóa môi trường một lần nữa.

Bài kiểm tra này nên được đọc sau 24 giờ ủ, bởi vì nếu bạn cố đọc trước khi bạn có thể hiểu sai bài kiểm tra với âm tính giả.

Cần phải nhớ rằng phản ứng đầu tiên xảy ra là quá trình lên men glucose, để môi trường chuyển sang màu vàng trong một pha ban đầu (10 đến 12 giờ đầu tiên). Nếu sau đó xảy ra quá trình khử carboxyl của ornithine, môi trường sẽ chuyển sang màu tím.

Điều quan trọng là phải diễn giải thử nghiệm khử carboxyl ornithine trước khi tiết lộ indole, vì việc bổ sung thuốc thử Kovacs làm thay đổi màu của môi trường.

Giải thích

Xét nghiệm âm tính: màu vàng trung bình hoặc với nền màu vàng.

Xét nghiệm dương tính: hoàn toàn màu tím.

Chỉ số PH

Trong trường hợp này màu tím bromocresol được sử dụng; người chịu trách nhiệm tiết lộ khi có sự thay đổi pH ở giữa. Khi bị axit hóa, chất chỉ thị chuyển sang màu vàng và khi kiềm hóa chuyển sang màu tím.

Hạt giống và kỹ thuật phát triển

Để trồng môi trường MIO, một vòng thẳng hoặc kim được sử dụng và với nó một phần thuộc địa cần nghiên cứu được thu thập..

Một vết đâm sâu được thực hiện trong môi trường MIO theo một đường thẳng. Không nên thực hiện chọc thủng đôi, vì nó có thể cho hình ảnh chuyển động sai nếu các vết thủng không được thực hiện ở cùng một nơi.

Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 37 ° C trong aerobiosis. Quan sát các kết quả theo thứ tự này: vận động, khử carboxyl của ornithine và cuối cùng tiết lộ indole.

Nên lấy 2 ml môi trường một cách vô trùng, chuyển nó vào ống vô trùng và thực hiện xét nghiệm indole ở đó, để nếu âm tính, phần còn lại của ống ban đầu có thể được ủ trong 24 giờ, để lộ lại indole.

Sự phát triển của indole được thực hiện theo cách sau: 3 đến 5 giọt thuốc thử Kovacs được thêm vào môi trường MIO và khuấy mạnh. Nó được quan sát nếu một vòng màu đỏ fuchsia xuất hiện hay không.

Chuẩn bị

Một nửa MIO

Cân 31 gr môi trường MIO và hòa tan trong một lít nước cất.

Đun cho đến khi hỗn hợp sôi trong một phút, khuấy thường xuyên cho đến khi agar tan hoàn toàn. Phân phối 4 ml môi trường trong 13/100 ống nghiệm có nắp bông.

Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Di chuyển khỏi nồi hấp và để nó đứng thẳng trong giá đỡ, theo cách mà một khối bán rắn được hình thành.

Bảo quản trong tủ lạnh 2-8 ° C. Để ủ trước khi trồng chủng vi khuẩn.

Màu của môi trường khử nước là màu be và của môi trường chuẩn bị hơi tím nhạt.

Độ pH cuối cùng của môi trường chuẩn bị là 6,5 ± 0,2

Môi trường chuyển sang màu vàng với pH axit và có màu tím ở pH kiềm.

Thuốc thử Kovacs (nhà phát triển thử nghiệm Indole)

Thuốc thử này được điều chế như sau:

150 ml amyl, isoamyl hoặc butyl alcohol (bất kỳ trong số ba) được đo. Trong đó 10 g p-dimethylaminobenzaldehyd được hòa tan. Sau đó, 50 ml axit clohydric đậm đặc được thêm vào từ từ.

Thuốc thử đã chuẩn bị không màu hoặc vàng nhạt. Nó nên được lưu trữ trong một chai hổ phách và giữ trong tủ lạnh. Một màu nâu sẫm cho thấy sự xấu đi của nó.

Ngoài ra thuốc thử Kovacs có thể được thay thế bằng thuốc thử Ehrlich. Loại thứ hai, nhạy cảm hơn, được ưu tiên tiết lộ indole ở vi khuẩn sản sinh ra nó với số lượng tối thiểu, như trong một số trực khuẩn không lên men Gram âm và một số vi khuẩn kỵ khí nhất định.

Sử dụng

Phương tiện này là một xét nghiệm bổ sung cho một loạt các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae.

Dữ liệu khử carboxyl hóa của ornithine phục vụ để phân biệt Shigella sonnei, điều đó mang lại sự tích cực Shigella boydii, Shigella flexneri và S. dysenterieae, điều đó mang lại tiêu cực.

Nó cũng phân biệt chi Klebsiella, mang âm tính, chi Enterobacter, trong đó hầu hết các loài của nó là dương tính.

Kiểm soát chất lượng

Mỗi khi chuẩn bị một lô môi trường MIO, có thể thực hiện kiểm tra kiểm soát. Đối với điều này, các chủng đã biết hoặc được chứng nhận được sử dụng để quan sát hành vi của môi trường.

Các chủng có thể được sử dụng là Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes và Proteus mirabilis.

Kết quả mong đợi là E. coli và M. morganii. Dân M: +, I: + và O: +.

Viêm phổi do Klebsiella đưa ra tất cả tiêu cực (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis và Enterobacter aerogenes dan M: + I: - và O: +.

Tài liệu tham khảo

  1. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Tái bản lần 3 Biên tập Panamericana. Thủ đô Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Tái bản lần thứ 5 Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  4. Phòng thí nghiệm Britania. MIO Medio 2015. Có tại: britanialab.com
  5. Phòng thí nghiệm BD BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Trung bình. Năm 2007 có sẵn tại: bd.com
  6. Phòng thí nghiệm Valtek Trung bình M.I.O. Động lực, Indole, Ornithine. Năm 2010 có sẵn tại: andinamedica.com