Nền tảng nửa SIM, chuẩn bị và sử dụng



các nửa SIM Nó là một agar semisolid và vi sai, được thiết kế đặc biệt để giúp xác định một số vi khuẩn, chủ yếu thuộc họ Enterobacteriaceae. Nó bao gồm triptein, peptone, sắt sulfate, ammonium sulfate, natri thiosulfate và agar.

Môi trường này cho phép thực hiện ba thử nghiệm quan trọng: sản xuất hydro sunfua (H2S), sự hình thành và vận động của indole, do đó là từ viết tắt SIM. Do tính hữu dụng tuyệt vời của nó, nó không thể thiếu trong phòng thí nghiệm vi khuẩn học.

Không giống như các phương tiện khác, đây phải là bán rắn để có thể phát hiện khả năng di chuyển của một số vi khuẩn. Theo nghĩa này, xét nghiệm này hoạt động rất tốt đối với Enterobacteriaceae, nhưng không phải trong trực khuẩn Gram âm, không lên men, trong đó ưu tiên sử dụng các phương pháp khác, ví dụ như thả chờ.

Phương tiện SIM cho phép phân biệt một số thuộc tính cụ thể đặc trưng cho một số vi khuẩn liên quan đến các vi khuẩn khác. Ví dụ Escherichia coli nó được phân biệt bằng H2S (-), Indole (+) và chuyển động (+), trong khi Proteus mirabilis nó là H2S (+), indole (-), chuyển động (+).

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Nguồn điện
    • 1.2 Sản xuất hydro sunfua
    • 1.3 Sự hình thành Indole
    • 1.4 Động lực
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 Nửa SIM
    • 2.2 Thuốc thử của Kovac
    • Thuốc thử 2.3 Erlich
  • 3 công dụng
    • 3.1 Hạt giống
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 hạn chế
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Nó là một môi trường nuôi cấy được coi là khác biệt, bởi vì việc sử dụng nó quản lý để phân biệt giữa các vi sinh vật có khả năng sản xuất hydro sunfua từ những vi khuẩn không; cũng làm nổi bật những người hình thành indole từ tryptophan của những người không hình thành nó, và cuối cùng phân biệt động lực từ vi khuẩn bất động.

Nguồn điện

Như bất kỳ môi trường nuôi cấy nào, nó có các yếu tố cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết để các vi sinh vật không đòi hỏi có thể phát triển. Những yếu tố này được đại diện bởi peptones và tripteína.

Sự phát triển của vi sinh vật trong môi trường là điều cần thiết để có thể quan sát sự hiện diện hay vắng mặt của các đặc tính được đánh giá bởi phương tiện này.

Sản xuất hydro sunfua

Chữ S của chữ viết tắt SIM dùng để chỉ việc sản xuất hydro sunfua (H2S). Vi khuẩn có khả năng hình thành hydro sunfua sẽ lấy lưu huỳnh của natri thiosulfate.

Khi H được hình thành2S - khí không màu - chất này phản ứng với muối sắt có trong môi trường, tạo thành sunfua sắt, nhìn thấy rõ (kết tủa màu đen). Vi khuẩn không hình thành H2S, để lại giữa màu gốc (màu be).

Sự hiện diện của kết tủa đen có thể cản trở việc giải thích sự vận động. Tuy nhiên, người ta biết rằng phần lớn vi khuẩn enterobacteria sản xuất H2S là sự vận động tích cực, chẳng hạn như Salmonella, Proteus và Citrobacter. Ngoài ra, kết tủa màu đen bao phủ gần như toàn bộ môi trường, cho thấy sự vận động tích cực.

Đào tạo Indole

Chữ cái thứ hai của chữ viết tắt SIM là "I", đại diện cho sự hình thành của indole.

Theo nghĩa này, tripteína, ngoài việc là một nguồn dinh dưỡng, còn hoàn thành một chức năng cơ bản khác. Peptone này rất giàu một loại axit amin gọi là tryptophan, do đó, nó có thể cho thấy vi khuẩn sản xuất tryptophanase.

Enzyme này chịu trách nhiệm cắt axit amin tryptophan, với sự hình thành của indole (chất không màu), axit pyruvic và amoni..

Đó là lý do tại sao, để chứng minh phản ứng này, cần phải thêm một chất tiết lộ (thuốc thử Ehrlich hoặc thuốc thử của Kovac). Một trong hai phản ứng với indole, tạo thành một chất fuchsia màu đỏ hình vòng trên bề mặt thạch. Nếu vòng fuchsia xuất hiện, thử nghiệm indole được hiểu là dương tính.

Vi khuẩn không có enzyme này, sẽ không tạo thành vòng và được hiểu là xét nghiệm indole âm tính.

Điều quan trọng là chỉ ra rằng thử nghiệm indole phải là lần cuối cùng được giải thích, vì một khi thuốc thử được thêm vào, môi trường trở nên nhiều mây khiến khó hình dung được sự chuyển động.

Động lực

Cuối cùng, chữ "M" của từ SIM có nghĩa là sự linh hoạt. Để có thể đánh giá khả năng vận động, phương tiện này là bán rắn chiến lược, bởi vì đặc tính này là rất cần thiết để có thể quan sát xem có sự di chuyển của vi khuẩn hay không. Những vi khuẩn có vi khuẩn Flagella là những vi khuẩn cho kết quả dương tính.

Một xét nghiệm dương tính sẽ được chứng minh khi độ đục được quan sát, cả trong chế phẩm ban đầu và xung quanh nó. Trong khi, vi khuẩn không di động chỉ phát triển theo con đường cấy ban đầu.

Chuẩn bị

Một nửa SIM

Cân 30 g môi trường khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Hỗn hợp được để yên trong 5 phút và sau đó đun nóng đến sôi, khuấy thường xuyên cho đến khi hòa tan hoàn toàn..

Phân phối hỗn hợp trong các ống nghiệm có nắp bông và nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Tháo giá đỡ ống ra khỏi nồi hấp và cho phép nó đông cứng ở vị trí thẳng đứng, sao cho môi trường có dạng hình khối..

Để lưu trữ, nó được giữ trong tủ lạnh cho đến khi nó được sử dụng. Môi trường đã chuẩn bị phải có pH cuối cùng là 7,3 ± 0,2.

Tại thời điểm cấy môi trường, nó phải ở nhiệt độ phòng. Màu của phương tiện là màu be.

Thuốc thử của Kovac

Đo 150 ml amyl hoặc isoamyl hoặc butyl alcohol. (Sử dụng một trong ba đề cập).

Hòa tan 10 g p-dimethylaminobenzaldehyd. Sau đó, từ từ thêm 50 ml axit clohydric đậm đặc.

Thuốc thử đã sẵn sàng để sử dụng là không màu hoặc vàng nhạt. Nó nên được giữ trong một chai màu hổ phách và được lưu trữ trong tủ lạnh. Không sử dụng nếu nó có màu nâu sẫm; điều đó chỉ ra rằng nó bị hư hại Thuốc thử này được ưu tiên khi xử lý vi khuẩn enterobacteria.

Thuốc thử Erlich

Cân 2 g p-dimethylaminobenzaldehyd và hòa tan trong 190 ml rượu ethyl tuyệt đối và trộn chậm với 40 ml axit clohydric đậm đặc. Giữ thuốc thử của Kovac theo cùng một cách. Thuốc thử Ehrlich được sử dụng nhiều hơn cho vi khuẩn không lên men và kỵ khí.

Công dụng

Môi trường SIM được sử dụng nhiều trong các phòng thí nghiệm vi khuẩn học. Nó có một lợi thế là trong cùng một ống, ba đặc điểm thiết yếu có thể được quan sát thấy trong việc xác định Enterobacteriaceae.

Đã gieo

Cách chính xác để gieo phương tiện này là sử dụng kim, trong đó một phần thuộc địa nguyên chất cần nghiên cứu được lấy và chèn vào giữa môi trường theo chiều dọc. Một lực đẩy duy nhất phải được thực hiện. Việc đâm thủng không được chạm đến đáy của ống, điều đúng đắn là chỉ che được hai phần ba độ sâu.

Không nên lặp lại chế phẩm, vì điều này có thể dẫn đến những diễn giải sai về sự vận động tích cực. Môi trường được nuôi cấy được ủ trong aerobiosis ở 37 ° C trong 24 giờ.

Kết thúc thời gian quan sát thấy có hay không sản xuất H2S và động lực được đọc. Cuối cùng, indole được tiết lộ, thêm 3 đến 4 giọt thuốc thử Ehrlich hoặc của Kovac, nó được trộn nhẹ nhàng và diễn giải.

Kiểm soát chất lượng

Như một biện pháp kiểm soát vô trùng, một hoặc hai ống được ủ mà không cần tiêm trong lò ở 37 ° C trong 24 giờ. Dự kiến ​​sau thời gian này sẽ không có sự tăng trưởng hay thay đổi màu sắc.

Để kiểm soát chất lượng, các chủng đã biết được chứng nhận có thể được sử dụng, như: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Viêm phổi do Klebsiella ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus Vulgaris ATCC 13315.

Kết quả dự kiến ​​là: Escherichia coli H2S âm tính, indole và động lực tích cực, Enterobacter aerogenes chỉ có động lực tích cực, Salmonella typhimurium H2S và chuyển động tích cực, với indole âm. Proteus Vulgaris tất cả tích cực, trong khi Viêm phổi do Klebsiella và Shigella sonnei tất cả tiêu cực.

Hạn chế

-Một số chủng Morganella morganii, Trong số các chủng khác có thể tạo ra sắc tố màu nâu trong môi trường này do sản xuất melanin, không nên nhầm lẫn với kết tủa của sunfua sắt. Trong các chuyên gia thiếu kinh nghiệm, tình huống này có thể tạo ra kết quả dương tính giả trong việc giải thích bài kiểm tra H2S.

-Vi khuẩn hiếu khí nghiêm ngặt sẽ chỉ phát triển trên bề mặt của ống, điều này gây khó khăn cho việc diễn giải sự vận động.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm BD SIM BBL vừa. 2008 Có sẵn tại: bd.com
  2. Phòng thí nghiệm Neogen SIM vừa. Có sẵn tại: an toàn thực phẩm
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM vừa. 2009. Có sẵn tại: http://f-soria.es
  4. Phòng thí nghiệm Brizuela-Lab SIM vừa. Có sẵn tại: .brizuela-lab.com
  5. Phòng thí nghiệm Britania. SIM vừa. 2015. Có sẵn tại: learnres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Tái bản lần thứ 5 Biên tập Panamericana S.A. Argentina.