Chia sẻ:
Chuẩn bị phương tiện văn hóa bao gồm những gì, mục tiêu và các bước
các chuẩn bị phương tiện văn hóa Đây là một phương pháp thường quy được sử dụng trong các phòng thí nghiệm cho sự phát triển của các vi sinh vật mong muốn. Môi trường nuôi cấy là các chế phẩm rắn, lỏng hoặc bán rắn có tất cả các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của quần thể vi sinh vật.
Nói chung, phương tiện để phát triển vi sinh vật rất giàu protein và axit amin và thường chứa một số thành phần ủng hộ sự phát triển của sinh vật mà bạn muốn nghiên cứu, chẳng hạn như vitamin, máu, huyết thanh, trong số những người khác..
Không có môi trường nuôi cấy chung hoặc phổ quát, vì thành phần của nó thay đổi tùy theo nhu cầu của vi sinh vật quan tâm. Một số vi khuẩn có thể phát triển trong bất kỳ môi trường nuôi cấy nào, nhưng một số khác có yêu cầu đặc biệt.
Chỉ số
- 1 Nó bao gồm những gì??
- 1.1 Agar
- 1.2 Chất lỏng
- 1.3 Chất chiết xuất
- 1,4 Pepton
- 1.5 Giảm xóc
- 2 mục tiêu
- 3 loại phương tiện truyền thông
- 3.1 Dựa trên thành phần của nó
- 3.2 Dựa vào loại vi sinh vật
- 4 bước
- 5 tài liệu tham khảo
Nó bao gồm những gì??
Các vi sinh vật, như nấm và vi khuẩn, không thể được nghiên cứu riêng lẻ vì kích thước nhỏ bé của chúng. Do đó, chúng phải được trồng trong các phương tiện nhân tạo cho phép tăng dân số đáng kể.
Ví dụ, nếu chúng ta muốn nghiên cứu vi khuẩn, chúng ta phải cung cấp cho chúng những điều kiện phù hợp để chúng có thể sinh sôi nảy nở và hình thành một thuộc địa (có thể quan sát bằng mắt thường).
Việc chuẩn bị môi trường nuôi cấy rất khác nhau tùy thuộc vào loại vi sinh vật mà người ta muốn nuôi trồng. Trước khi chuẩn bị, cần phải biết nhu cầu dinh dưỡng cơ bản của cơ thể làm việc.
Tiếp theo, các thành phần phổ biến nhất được sử dụng trong môi trường nuôi cấy sẽ được mô tả để có ý tưởng chung về sự chuẩn bị của chúng:
Thạch
Nó được sử dụng trong cây trồng như một chất keo và được thêm vào khi tìm kiếm một môi trường rắn hoặc bán rắn. Tác nhân hóa rắn đầu tiên được sử dụng trong điều chế môi trường là gelatin, nhưng vào năm 1883, agar đã được đưa vào thế giới vi khuẩn học bởi W. Hesse.
Agar vi khuẩn có thành phần chính là một polysacarit của các nhánh phức tạp được chiết xuất từ tảo. Hợp chất này được sử dụng làm chất làm đặc cho các loại thực phẩm phổ biến như kem và mứt.
Nó là một yếu tố rất có giá trị trong vi sinh vì nhiều lý do. Chủ yếu là do các vi sinh vật không thể làm suy giảm nó, hóa lỏng ở nhiệt độ 100 ° C và duy trì ở trạng thái lỏng cho đến khi đạt 45 ° C hoặc ít hơn.
Trong trường hợp bạn muốn chuẩn bị môi trường rắn, nồng độ agar nên ở khoảng 1,5%, trong khi chất bán rắn nên được chuẩn bị từ 0,3 đến 0,5%.
Chất lỏng
Việc trồng các sinh vật gây bệnh đòi hỏi chất lỏng cơ thể để chúng có thể phát triển như trong môi trường tự nhiên của chúng. Vì lý do này, máu toàn phần hoặc khử rung được thêm vào. Chất lỏng được chiết xuất từ một động vật khỏe mạnh và sau khi được khử trùng, được thêm vào môi trường nuôi cấy.
Chất chiết xuất
Chúng được lấy từ các bộ phận động vật khác nhau (như thịt hoặc gan) hoặc rau (hạt) và được chế biến để thu được một chất cô đặc rắn ở dạng bột nhão hoặc bột. Phổ biến nhất là men, mạch nha và thịt.
Pepton
Các hợp chất hữu cơ này thu được bằng cách thủy phân enzyme hoặc hóa học của mô động vật hoặc thực vật. Mục đích là để thêm nội dung giàu axit amin, là đơn vị cơ bản của protein.
Giảm xóc
Bộ đệm hoặc hệ thống đệm tránh những thay đổi đột ngột về độ pH và giúp duy trì phạm vi tối ưu mà cơ thể dung nạp.
Hầu hết các sinh vật có thể phát triển đúng ở độ pH 7, mặc dù một số vi khuẩn thích môi trường kiềm. Tuy nhiên, có những vi khuẩn chống lại sự thay đổi pH giữa các giá trị của 6 và 9.
Ở những loài nhạy cảm với pH, thiệt hại không được tạo ra bởi lượng ion hydro hoặc hydroxyl quá mức, mà do sự gia tăng của các axit hoặc bazơ yếu có thể xâm nhập vào tế bào.
Ngoài ra, các chỉ số pH để theo dõi nó và tránh các sai lệch gây ra bởi quá trình lên men hoặc các quá trình khác được thêm vào.
Mục tiêu
Mục tiêu chính khi chuẩn bị môi trường nuôi cấy là thêm tất cả các thành phần cần thiết để cho phép sự phát triển thành công của sinh vật muốn được phân lập. Sự kết hợp hiệu quả nhất của các thành phần và chất dinh dưỡng phải được xác định để đạt được môi trường mong muốn.
Cả việc chuẩn bị và lưu trữ môi trường đều rất quan trọng để đảm bảo sự tăng trưởng thành công, vì các bước này phụ thuộc vào thành phần của môi trường và sự sẵn có của các chất dinh dưỡng.
Cần phải tính đến việc nuôi cấy vi sinh vật là một nhiệm vụ bị ảnh hưởng bởi một số yếu tố bên ngoài môi trường nuôi cấy, chẳng hạn như cường độ ánh sáng nhận được, nhiệt độ và mức độ axit hoặc độ kiềm của môi trường. Do đó, mỗi trong số các biến này phải được tính đến.
Các loại phương tiện truyền thông
Dựa trên thành phần của nó
Dựa trên thành phần của nó, có ba loại cây trồng chính: tự nhiên hoặc theo kinh nghiệm, bán tổng hợp và xác định phương tiện hóa học.
Môi trường tự nhiên
Trong môi trường tự nhiên thành phần chính xác là không rõ. Chúng bao gồm các thành phần như sữa, máu pha loãng, nước ép rau, chiết xuất và truyền của thịt và pepton. Vì lý do kinh tế, các thành phần chi phí thấp thường được thêm vào như chiết xuất đậu nành, váng sữa, mật rỉ, v.v..
Phương tiện bán tổng hợp
Nó được gọi là môi trường bán tổng hợp nếu thành phần của nó được biết một phần. Bất kỳ môi trường có chứa agar đều trở thành môi trường bán tổng hợp.
Trong số đó, chúng ta có agar papa dextrose, agar czapek-dox, agar yến mạch, agar thịt peptone, trong số các ví dụ khác.
Môi trường tổng hợp hoặc hóa chất được xác định
Trong trường hợp này, thành phần của môi trường - về lượng carbon, nitơ, lưu huỳnh, phốt pho và bất kỳ nguồn yếu tố tăng trưởng nào khác - được biết đến đầy đủ. Nó rất hữu ích nếu bạn muốn có được kết quả có thể lặp lại cho các nhà nghiên cứu khác.
Đối với cái gọi là "vi sinh vật có yêu cầu tăng trưởng đặc biệt", cần phải thêm các thành phần cần thiết. Một ví dụ về loại này là Lactobacillus.
Dựa vào loại vi sinh vật
Tương tự, có một phân loại khác cho môi trường nuôi cấy dựa trên loại vi sinh vật có thể phát triển trong đó. Theo nguyên tắc này, chúng tôi có các phương tiện làm giàu, chọn lọc và khác biệt chung sau đây. Mỗi cái được mô tả dưới đây:
Phương tiện chung
Chúng thừa nhận sự phát triển của nhiều loại vi sinh vật. Nếu bất kỳ sinh vật nào cần điều kiện đặc biệt cho sự tăng trưởng của nó, nó sẽ không thể phát triển thành công trong loại cây trồng này.
Làm giàu có nghĩa là
Các phương tiện làm giàu có lợi cho sự phát triển của một loại vi sinh vật nhất định, nhưng không có chất nào được thêm vào để ngăn chặn các loại vi khuẩn khác phát triển trong đó..
Phương tiện chọn lọc
Họ tìm kiếm sự tăng trưởng cụ thể của một vi sinh vật, gọi nó là nấm, vi khuẩn, động vật nguyên sinh, trong số những người khác. Để làm điều này, họ kìm hãm sự phát triển của người khác.
Để đạt được mục tiêu này, có thể thêm các hợp chất hóa học chết người cho một nhóm lớn các vi sinh vật và vô hại đối với các sinh vật quan tâm hoặc thêm các nguồn năng lượng chỉ có thể được đồng hóa bởi vi khuẩn tìm kiếm.
Môi trường chọn lọc được sử dụng khi lấy mẫu y tế để phát triển vi sinh vật gây bệnh. Ở đây cần phải ủng hộ sự phát triển của mầm bệnh và ức chế sự phát triển của hệ vi khuẩn bình thường từ bệnh nhân.
Ví dụ, thạch Bismuth sulphite không cho phép sự phát triển của vi khuẩn gram dương và một số lượng lớn vi khuẩn được tìm thấy trong khoang tiêu hóa. Do đó, nó được sử dụng để nuôi cấy vi khuẩn gram âm gây ra bệnh thương hàn, Salmonella typhi trong các mẫu phân.
Phương tiện vi sai
Loại này sử dụng một số tính năng chẩn đoán của sinh vật quan tâm (ví dụ đặc thù trong quá trình trao đổi chất của nó) để có thể xác định chúng chống lại một loài khác phát triển trong cùng một môi trường.
Cả môi trường vi phân và môi trường chọn lọc đều rất hữu ích trong lĩnh vực vi sinh lâm sàng và y tế công cộng, vì các ngành này cần phát hiện sự hiện diện của các vi sinh vật cụ thể liên quan đến điều kiện hoặc điều kiện vệ sinh kém..
Các chất chỉ thị có thể được thêm vào cây trồng mang lại một đặc điểm riêng biệt cho thuộc địa mong muốn. Ví dụ, màu xanh agar-eosin-methylene (viết tắt EMB) và MacConkey-agar được thêm vào với đường sữa và chỉ số pH.
Do đó, khi một thuộc địa được phát triển trong các môi trường này với khả năng lên men đường sữa và sản xuất aldehyd, chúng có thể được quan sát thấy trong một màu đặc biệt.
Các bước
Hiện tại các phương tiện nuôi cấy có thể được mua ở dạng đông khô. Do đó, việc chuẩn bị được tạo điều kiện và chỉ có sản phẩm được bù nước. Nội dung phải được cân nhắc (có tính đến số lượng cuối cùng mà bạn muốn chuẩn bị) và hòa tan trong nước cất theo tất cả các chỉ dẫn của sản phẩm.
Nội dung của môi trường lỏng phải được chia thành các thùng chứa mong muốn (đĩa Petri, ống, v.v.) để khử trùng tiếp theo. Để phân phối môi trường rắn, cần phải làm tan chảy nó bằng lò vi sóng hoặc bằng cách cho vật liệu vào bể nước. Độ pH của môi trường phải được điều chỉnh.
Thông thường agar được sử dụng trong các ống nghiệm hoặc trong các đĩa Petri. Nếu agar đông cứng ở vị trí nghiêng, với góc thích hợp sao cho cạnh cuối cùng là đường chéo, sự sắp xếp này được gọi là đỉnh sáo hoặc ống nghiêng. Khi agar đông cứng ở vị trí thẳng đứng hoàn toàn, nó được gọi là "sâu".
Sau khi khử trùng môi trường - sử dụng nồi hấp - chúng được phép làm mát. Chúng phải được xử lý trong môi trường không có vi sinh vật, phổ biến nhất là làm việc với một chiếc bật lửa đảm bảo môi trường vô trùng trong khu vực lân cận.
Tài liệu tham khảo
- Celis, J. E. (2006). Sinh học tế bào: một cẩm nang phòng thí nghiệm (Tập 2). Yêu tinh.
- Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: chẩn đoán vi sinh. Y khoa Pan American.
- Olivas, E. (2004). Hướng dẫn thực hành vi sinh vật I và II và ký sinh trùng. Đại học tự trị Ciudad Juárez.
- Schlegel, H. G., & Zaborosch, C. (1993). Vi sinh vật đại cương. Nhà xuất bản Đại học Cambridge.
- Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2007). Giới thiệu về vi sinh. Ed. Panamericana Y tế.