Nền tảng nước dùng EC, chuẩn bị và sử dụng



các Nước dùng EC hoặc nước dùng Escherichia coli Nó là một môi trường nuôi cấy lỏng chọn lọc. Phương tiện này được các Phương pháp tiêu chuẩn khuyến nghị để đếm tổng coliforms và phân, bằng kỹ thuật số có thể xảy ra nhất (NMP) trong các mẫu nước và thực phẩm, trong đó tác nhân chính liên quan là Escherichia coli.

Nước dùng EC bao gồm triptein, lactose, muối mật, dipotali phosphate, monopotali phosphate, natri clorua và nước. Công thức của nó được thiết kế một cách chiến lược để ủng hộ sự phát triển của coliforms tổng và phân và ngăn chặn sự phát triển của các vi sinh vật đi kèm khác.

Vi khuẩn Escherichia coli là coliform phân chính hiện diện như một chất gây ô nhiễm trong nguồn nước và thực phẩm, gây ra những ảnh hưởng quan trọng đến đường tiêu hóa.

Cần lưu ý rằng có nhiều kiểu huyết thanh của Escherchia coli; trong số đó, chúng ta có thể kể đến enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropathogen (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) và enteroaggregative (EAEC).

Điều này có nghĩa là có khả năng cho phép phát triển tất cả chúng, nhưng không thể phân biệt giữa chúng. Để làm điều này, các thử nghiệm bổ sung phải được thực hiện.

Nghiên cứu vi sinh học về nước và thực phẩm theo số lượng có thể xảy ra nhất (NMP) để tìm kiếm coliforms tổng và phân là một giao thức được tuân thủ theo nhiều giai đoạn; giai đoạn giả định, giai đoạn xác nhận và giai đoạn hoàn thành. Nước dùng EC được sử dụng trong giai đoạn xác nhận.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • Nước dùng 1.1 EC
    • 1.2 EC canh được sửa đổi với novobiocin
  • Chuẩn bị 2
    • Nước dùng 2.1 EC
    • 2.2 Nước dùng EC được sửa đổi với novobiocin
  • 3 Sử dụng
    • 3.1 Phân tích coliforms tổng và phân
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 khuyến nghị
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Nước dùng EC

Môi trường EC dựa trên việc cung cấp các yếu tố dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển tối ưu của coliforms tổng và phân, trong đó bao gồm cả vi khuẩn Escherichia coli.

Những yếu tố dinh dưỡng này được cung cấp bởi triptein, là một nguồn tuyệt vời của peptide và axit amin. Ngoài ra, nó cũng chứa đường sữa, một loại carbohydrate có thể lên men cung cấp năng lượng và cho phép hiển thị nếu vi khuẩn tạo ra khí.

Mặt khác, môi trường chứa muối mật cung cấp đặc tính chọn lọc, vì nó ức chế sự phát triển của vi sinh vật gram dương có thể có trong mẫu..

Tương tự như vậy, dipotosphat kali và monopotali phosphate hoạt động như một hệ thống cân bằng pH. Hệ thống này là cần thiết, bởi vì đường sữa có trong nước dùng có xu hướng axit hóa môi trường khi nó được lên men bởi các vi sinh vật, nhưng điều này được bù lại bằng muối photphat.

Do đó, các yếu tố này rất cần thiết, bởi vì độ axit không được kiểm soát có thể ảnh hưởng đến sự phát triển thích hợp của các vi sinh vật tìm kiếm.

Về phần mình, natri clorua ổn định môi trường thẩm thấu, trong khi nước là dung môi của các chất hòa tan và cung cấp độ đặc của chất lỏng cho môi trường.

Nước dùng EC được sửa đổi với novobiocin

Okrend và Rose đã tạo ra một loạt các nhà thổ EC, được gọi là nhà thổ EC được sửa đổi với novobiocin. Việc sửa đổi bao gồm giảm nồng độ muối mật và bổ sung 20 mg / dl novobiocin.

Sửa đổi này ủng hộ sự phục hồi của các chủng Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

Kiểu huyết thanh vi khuẩn này gây ra viêm đại tràng xuất huyết nghiêm trọng có thể gây ra hội chứng urê huyết tán huyết (HUS); do đó có thể gây ra suy thận cấp tính, với tỷ lệ tử vong cao có thể đạt tới 50% ở người cao tuổi.

Do tỷ lệ mắc bệnh và tử vong do vi khuẩn này gây ra hàng năm do tiêu thụ thực phẩm bị ô nhiễm, Bộ Nông nghiệp Hoa Kỳ (USDA) khuyến cáo rộng rãi việc sử dụng phương tiện này.

Chuẩn bị

Nước dùng EC

Cân 37,4 gr môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Hỗn hợp nên được để yên trong 5 phút. Sau đó, trong một nguồn nhiệt, hòa tan thường xuyên.

Sau khi hòa tan, nó được phân phối trong các ống nghiệm trước đây được điều hòa với một ống Durham bên trong. Tiệt trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Độ pH của môi trường nên là 6,9 ± 0,2. Màu của môi trường khử nước là màu be và được chuẩn bị là màu hổ phách nhạt.

Các loại rượu vang được lưu trữ trong tủ lạnh cho đến khi chúng được sử dụng. Tại thời điểm sử dụng, nước dùng phải ở nhiệt độ phòng.

Mặt khác, nước dùng EC cũng có thể được chuẩn bị ở nồng độ gấp đôi.

Nước dùng EC được sửa đổi với novobiocin

Cân 36,7 gr môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước. Phần còn lại của việc chuẩn bị giống như mô tả ở trên.

Sử dụng

Phân tích tổng coliforms và phân

Môi trường EC là lý tưởng cho giai đoạn xác nhận nghiên cứu coliforms bằng phương pháp NMP, cả trong mẫu nước, như trong các sản phẩm dược phẩm và thực phẩm.

Lười biếng và nước canh sản xuất khí thu được trong giai đoạn giả định nên được đặt lại trong mật 2% màu xanh lá cây tươi sáng và nước dùng EC.

Đối với tổng coliform, môi trường EC được ủ trong aerobiosis trong 24 đến 48 giờ ở 37 ° C, và đối với coliforms phân, chúng được ủ trong aerobiosis trong 24 đến 48 giờ ở 44 ° C.

Trong cả hai trường hợp, nó được diễn giải theo cách sau: các ống đục có sản xuất khí được coi là dương tính. Nếu không có sản xuất khí trong 24 giờ, việc ủ vẫn được tiếp tục trong tối đa 48 giờ.

Các môi trường tích cực EC chuyển sang giai đoạn xác nhận hoàn chỉnh, bao gồm việc gieo hạt trong môi trường chọn lọc như môi trường thạch Mac Conkey, môi trường thạch EMB hoặc môi trường thạch Endo..

Nếu nước dùng được sử dụng là EC được điều chỉnh bằng novobiocin, các ống dương tính được khuyến nghị sử dụng lại trên môi trường thạch Mac Conkey với sorbitol.

Kiểm soát chất lượng

Kiểm soát chất lượng phải được thực hiện trên mỗi lô môi trường chuẩn bị. Đầu tiên, phải đánh giá tính vô trùng của môi trường. Theo nghĩa này, một hoặc hai nước dùng được ủ mà không cần tiêm trong aerobiosis trong 24 giờ ở 37 ° C. Kết quả dự kiến ​​là nước dùng trong suốt, không có độ đục hoặc thay đổi màu sắc.

Thứ hai, cần đánh giá sự tăng trưởng của các chủng đã biết, trong đó có thể sử dụng các vi khuẩn sau: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Trong mọi trường hợp, dự kiến ​​sẽ phát triển vi sinh vật thỏa đáng, quan sát môi trường nước đục với sản xuất khí cho E.coli và không có gas cho Salmonella.

Các chủng khác có thể được bao gồm trong kiểm soát là: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Những chủng này phải bị ức chế hoàn toàn.

Khuyến nghị

-Vị trí của các ống Durham rất cần thiết cho nghiên cứu về coliforms.

-Phân phối môi trường trong các ống nghiệm trước khi khử trùng, không bao giờ sau.

-Không sử dụng nếu phương tiện có hơn 3 tháng chuẩn bị.

-Không sử dụng nếu có bất kỳ thay đổi nào trong các đặc tính thông thường của phương tiện.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm Britania. EC trung bình. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  2. E.coli enterohemorrhagic. Trung tâm an ninh lương thực và sức khỏe cộng đồng. Năm 2010 có sẵn tại: cfsph.iastate.edu
  3. Tổng công ty Neogen. EC trung bình. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  4. Thần kinh EC trung bình được sửa đổi với novobiocin. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Phát hiện, phân lập và mô tả đặc điểm của Escherichia coli nhà sản xuất độc tố Shiga từ thịt bò xay tươi từ các cửa hàng bán thịt ở Concepción, tỉnh Tucumán. Rev Microgol bởi Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Có sẵn tại: www.scielo.org.