Nền tảng nước dùng, chuẩn bị và sử dụng



các nước dùng đường sữa là một môi trường nuôi cấy lỏng, không chọn lọc, chủ yếu được sử dụng làm môi trường làm giàu trước khi phân lập các chủng Salmonella từ phân tích vi sinh được thực hiện trên thực phẩm chế biến, các sản phẩm sữa hoặc nước. Điều này được Ủy ban quốc tế về thông số kỹ thuật vi sinh cho thực phẩm (ICMPF) khuyến nghị.

Môi trường chứa enzyme tiêu hóa gelatin, chiết xuất thịt và đường sữa, các chất cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn. Ngoài ra, đường sữa là một loại carbohydrate có thể lên men, vì vậy một số coliform có thể phân tách nó với việc sản xuất khí.

Vì lý do này, nước dùng đường sữa được Hiệp hội Y tế Công cộng Hoa Kỳ (APHA) khuyến nghị cho nghiên cứu giả định về vi khuẩn coliform tổng số và phân, đủ điều kiện là một thay thế tuyệt vời để thay thế nước dùng ba lần lauryl sulfate trong kỹ thuật tiêu chuẩn của Số có khả năng nhất (NMP). ), được sử dụng để phân tích vi sinh của các mẫu thực phẩm, sữa và nước mặt, chất thải ngầm, giải trí, sinh hoạt và công nghiệp.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
  • 3 công dụng
    • 3.1 Làm giàu trước
    • 3.2 Phân tích coliforms tổng và phân
  • 4 Kiểm soát chất lượng của phương tiện
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Đối với phân tích vi sinh của một số mẫu, bước làm giàu trước là rất cần thiết để có thể phục hồi một loại vi sinh vật cụ thể có thể với số lượng rất thấp hoặc trong điều kiện bất lợi vi phạm hoặc giảm thiểu khả năng sống sót của nó.

Đó là trường hợp thực phẩm khô và chế biến, có thể bị ô nhiễm Salmonellas sp. Trong những trường hợp này, nếu vi khuẩn có mặt, họ đã bị ngược đãi vật lý và hóa học trong quá trình sản xuất sản phẩm..

Theo cách mà các vi sinh vật tiếp xúc với các yếu tố bất lợi như mất nước, tiếp xúc với các sản phẩm gây ức chế hoặc độc hại và sự chồng chéo được tạo ra bởi sự hiện diện của các vi khuẩn khác với số lượng lớn hơn..

Theo nghĩa này, nước dùng đường sữa có tác dụng sửa chữa các cấu trúc bị hư hỏng của vi sinh vật, khiến nó phục hồi và sinh sản, theo cách mà nó có thể được phát hiện.

Tương tự như vậy, nước dùng đường sữa có khả năng pha loãng các chất ức chế có thể ảnh hưởng đến khả năng tồn tại của nó, cho phép sự phát triển của nó. Ngoài ra, thành phần dinh dưỡng của nước dùng đường sữa là chiến lược để tạo thuận lợi cho sự phát triển của Salmonella sp trên các vi sinh vật khác.

Để xác định cuối cùng, nó phải được canh tác phụ theo các phương thức khác của cây trồng dứt khoát.

Mặt khác, thành phần của môi trường cũng cho phép phát hiện các vi sinh vật lên men đường sữa tạo ra khí.

Chuẩn bị

Để chuẩn bị một lít nước dùng đường sữa, cân 13 gram môi trường khử nước và hòa tan trong 1000 ml nước cất.

Để giúp hòa tan môi trường trong nước, bạn có thể làm nóng dung dịch một chút, nhưng không quá nhiều..

Sau khi đồng nhất, dung dịch được chuẩn bị như sau: nếu nước dùng được sử dụng để tìm kiếm coliforms, một giá đỡ với các ống nghiệm được chuẩn bị và một ống lên men Durham được đặt lộn ngược.

Ống Durham là một chi tiết rất quan trọng, bởi vì nó sẽ cho phép phát hiện sự hình thành của khí, dữ liệu có giá trị trong quá trình tìm kiếm coliforms.

Khi các ống đã sẵn sàng, 10 ml nước dùng đường sữa được phân phối vào chúng, chúng phải đủ để bao phủ toàn bộ ống Durham..

Nếu nước dùng đường sữa sẽ được sử dụng làm nước dùng làm giàu trước, thì không cần thiết phải đặt ống lên men Durham. Trong trường hợp này, cần một lượng trung bình lớn hơn (225 ml), sẽ được phục vụ trong chai 500 ml, miệng rộng và có nắp vặn chịu nhiệt.

Sau đó, các ống hoặc bình được đưa đến nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Môi trường phải duy trì ở pH cuối cùng là 6,9 ± 0,2 ở 25 ° C.

Các loại rượu vang được lưu trữ trong tủ lạnh cho đến khi chúng được sử dụng.

Trước khi sử dụng, nước dùng phải được ủ ở nhiệt độ phòng.

Mặt khác, nước dùng đường sữa cũng có thể được điều chế ở nồng độ gấp đôi.

Một số phòng thí nghiệm thêm màu tím bromocresol vào nước dùng đường sữa làm chỉ số pH, để hiển thị các ống nơi đã có quá trình lên men đường sữa do sự thay đổi màu sắc. Trong trường hợp này, nước dùng có màu tím và nếu lên men chuyển sang màu vàng.

Công dụng

Trong các phòng thí nghiệm vi sinh, nước dùng cho con bú được sử dụng rộng rãi như một phương tiện tương đối rẻ tiền mang lại kết quả nhanh và đáng tin cậy (24-48 giờ).

Nó có thể được sử dụng để phân tích coliforms tổng và phân trong nước và thực phẩm hoặc làm nước dùng làm giàu trước cho Salmonella.

Làm giàu trước

Làm giàu trước là một bước trước khi làm giàu mẫu, giúp cải thiện đáng kể sự phục hồi của vi khuẩn thuộc chi Salmonella trong thực phẩm chế biến.

Để làm điều này, mẫu của thức ăn rắn (25 gram) hoặc chất lỏng (25 ml) được gieo vào 225 ml nước dùng đường sữa, và ủ trong 24 đến 48 giờ. Sau đó, nước dùng selenite cystine hoặc nước dùng tetrathionate sẽ được nuôi cấy trong môi trường được làm giàu. Sau đó, nó chuyển sang phương tiện chọn lọc XLD và SS.

Phân tích tổng coliforms và phân

Nó là một phương tiện tuyệt vời như là một chỉ số về ô nhiễm phân.

Do đó, nước dùng đường sữa là lý tưởng cho giai đoạn giả định của nghiên cứu coliform bằng phương pháp Số có thể xảy ra nhất.

Đối với các mẫu nghi ngờ có một lượng lớn coliforms, một lượng coliforms nhỏ hơn sẽ được tiêm (1 ml), trong khi đối với các mẫu nghi ngờ có lượng coliforms thấp hơn, thể tích mẫu sẽ được tiêm nhiều hơn (10 ml)..

10 pha loãng được thực hiện để phân tích-1, 10-2, 10-3, tạo thành một pin 3-5 ống cho mỗi nồng độ sử dụng.

Từ mỗi độ pha loãng, cùng một thể tích được gieo vào nước dùng đường sữa.

Các ống được ủ trong 24 giờ. Nước dùng âm tính được ủ trong 24 giờ nữa.

Việc giải thích kết quả được thực hiện bằng cách quan sát hai đặc điểm: thứ nhất là sự hiện diện hay không có độ đục và vì môi trường này không chứa chỉ thị pH, sẽ không có thay đổi màu sắc.

Thứ hai là sản xuất hay không khí. Khí được thể hiện dễ dàng trong ống Durham, bởi sự xuất hiện của một hoặc nhiều bọt khí bên trong.

Nó được coi là tích cực nếu cả hai đặc điểm được quan sát, nghĩa là độ đục với sản xuất khí. Các ống dương tính nên được gieo lại trong môi trường xác nhận (nước dùng Brilliant Green 2% Bile và EC broth).

Kiểm soát chất lượng của phương tiện

- Trong quá trình chuẩn bị môi trường, điều quan trọng là đừng quên đặt các ống Durham nếu mục đích tương tự là nghiên cứu về coliforms.

- Không quá nóng môi trường trước khi khử trùng.

- Phân phối trong các ống nghiệm trước khi khử trùng, không bao giờ sau.

- Không sử dụng nếu phương tiện có hơn 3 tháng chuẩn bị.

- Không sử dụng nếu bạn nhận thấy bất kỳ thay đổi trong các đặc điểm thông thường của phương tiện.

- Khi chuẩn bị một mẻ nước dùng đường sữa, hãy kiểm tra chất lượng của nó bằng cách trồng các chủng được gọi là Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii và Viêm phổi do Klebsiella. Chúng phát triển rất tốt, với sản xuất khí (kiểm soát tích cực).

- Nó cũng có thể bao gồm Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, phát triển tốt, nhưng không có sản xuất khí (kiểm soát tiêu cực).

- Cần lưu ý rằng màu gốc của môi trường khử nước là màu be và của môi trường được chuẩn bị màu vàng rất trong và trong suốt. Nếu có sự thay đổi về màu sắc hoặc ngoại hình, có thể có sự suy giảm giống nhau.

Tài liệu tham khảo

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Sinh học và vi sinh vật môi trường. (2013) Phiên bản 1. Đại học Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B và Velázquez O. (2009). Kỹ thuật phân tích vi sinh thực phẩm. Tái bản lần 2 Khoa Hóa học, UNAM. Mexico.
  3. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Năm 2017. Nồng độ Lactose tăng gấp đôi (Dược phẩm Châu Âu)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. So sánh các kỹ thuật chiết xuất vi khuẩn coliform từ trầm tích hồ Xochimilco, Mexico. Rev. microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Có sẵn tại: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Xác định chất lượng vi sinh của vùng nước giếng khoan của các quận thuộc Trung ương, Cordillera và các đô thị thủ đô. Bản ghi nhớ điều tra. Cienc. Sức khỏe 2013; 11 (1): 5-14. Có sẵn từ: scielo.iics.