Selenite nền tảng nước dùng, chuẩn bị và sử dụng



các nước dùng selenit Nó là một môi trường nuôi cấy lỏng chọn lọc. Nó được thiết kế bởi Leifson để làm phong phú các mẫu trong đó nghi ngờ có sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh đường ruột của chi Salmonella..

Phương tiện này đáp ứng các yêu cầu của Hiệp hội Y tế Công cộng Hoa Kỳ (APHA), và do đó được chấp nhận để điều tra sự hiện diện của Salmonella trong các mẫu phân, nước tiểu, thức ăn lỏng hoặc rắn, nước, trong số những thứ khác..

Thành phần hóa học mà nó sở hữu giúp phục hồi các vi sinh vật này và do đó ức chế sự phát triển của các vi sinh vật khác. Nó chủ yếu gây độc cho hầu hết các vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae. Tuy nhiên, nó cũng cho phép phục hồi các chủng Shigella và không ức chế sự phát triển của Pseudomonas và Proteus..

Nó bao gồm natri hydro selenit khan, natri photphat khan, pepton và đường sữa. Ngoài ra còn có một biến thể mà cystine được thêm vào, do đó tên của nó là nước dùng selenite-cystine.

Hiện nay, việc sử dụng nước dùng selenite-cystine được ưa thích hơn, vì tỷ lệ thu hồi Salmonella cao hơn, tương đương với việc sử dụng các môi trường chọn lọc khác có cùng mục đích, chẳng hạn như nước dùng natri Tetrathionate..

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 - Selena
    • 2.2 -Preparation của phương tiện thương mại
    • 2.3 Nước dùng selenite-cystine biến thể
  • 3 công dụng
  • 4 hạt giống
  • 5 Kiểm soát chất lượng
  • 6 hạn chế
  • 7 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Các pepton có trong nước dùng đóng vai trò là chất dinh dưỡng cho sự phát triển thích hợp của vi sinh vật. Các chủng Salmonella sử dụng pepton như một nguồn nitơ, vitamin và axit amin.

Lactose là carbohydrate có thể lên men, trong khi natri selenite là chất ức chế làm chậm sự phát triển của vi khuẩn gram dương và hầu hết các vi khuẩn có trong hệ thực vật đường ruột, đặc biệt là họ Enterobacteriaceae. Natri photphat là chất đệm ổn định pH của môi trường.

Trong trường hợp biến thể nước dùng selenite chứa L-cystine, hợp chất bổ sung này là chất khử giúp giảm thiểu độc tính của selenite, làm tăng sự phục hồi của Salmonella.

Chuẩn bị

-Nước dùng Selenite

Nếu bạn có các thành phần của hỗn hợp, bạn có thể cân:

4 gr natri hydro selenit khan.

10 g natri photphat khan.

5 gr pepton.

4 gr đường sữa.

Hòa tan các hợp chất trong 1 lít nước cất vô trùng. Nó có thể được làm nóng nhẹ để hòa tan toàn bộ.

Một số phòng thí nghiệm phơi môi trường trong 10 phút trong hơi nước trôi chảy để khử trùng nó, vì không nên sử dụng nồi hấp. Nếu môi trường được khử trùng, nó có thể được lưu trữ trong tủ lạnh cho đến khi nó được sử dụng.

Nó cũng có thể được chuẩn bị mà không cần khử trùng và phục vụ trực tiếp 10 đến 15 ml vào các ống nghiệm vô trùng.

Trong trường hợp này, nó nên được nghỉ ngơi và sử dụng ngay lập tức. Vì môi trường không vô trùng, nó không thể được lưu trữ trong tủ lạnh để sử dụng sau.

-Chuẩn bị môi trường thương mại

Nếu môi trường thương mại có sẵn, 23 g môi trường khử nước được cân và hòa tan trong một lít nước cất vô trùng. Ấm áp ngắn ngủi để kết thúc hòa tan. Không khử trùng trong nồi hấp. Cho vô trùng 10 hoặc 15 ml vào ống nghiệm vô trùng.

Độ pH cuối cùng của môi trường phải là 7,0 ± 0,2.

Cần lưu ý rằng màu của môi trường khử nước là màu be và sự chuẩn bị là màu hổ phách rõ ràng và mờ.

Biến thể selenite-cystine

Nó chứa các hợp chất tương tự của nước dùng selenite, nhưng thêm 10 mg cystine. Phần còn lại của quy trình hoàn toàn giống như mô tả ở trên.

Công dụng

Phương tiện này đặc biệt được sử dụng trong các nghiên cứu dịch tễ học, trong trường hợp bệnh không ở giai đoạn cấp tính, bệnh nhân không có triệu chứng hoặc người mang mầm bệnh khỏe mạnh.

Việc phân lập chi Salmonella thường rất khó khăn, vì chúng thường được tìm thấy làm nhiễm bẩn các mẫu một cách khan hiếm. Ở số lượng nhỏ dễ bị chồng chéo bởi sự phát triển của các giống vi khuẩn khác được tìm thấy với số lượng lớn hơn.

Mặt khác, nguyên liệu thô mà thực phẩm chế biến được chế biến thường tiếp xúc với nhiệt, quá trình khử nước, sử dụng chất khử trùng, phóng xạ và chất bảo quản, trong số những thứ khác..

Do đó, Salmonellas có trong nguyên liệu thô bị ngược đãi bởi việc đưa sản phẩm vào các quy trình công nghiệp đã nói ở trên. Tương tự như vậy, trong trường hợp các mẫu lâm sàng như phân, các chủng có thể yếu nếu chúng đến từ những bệnh nhân đã được điều trị bằng kháng sinh..

Do đó, bất kỳ mẫu nào nghi ngờ có sự hiện diện của Salmonella đều phải được làm giàu trước trong nước dùng đường sữa, và sau đó được làm giàu trong nước dùng selenite để tối ưu hóa sự phục hồi của nó trong môi trường chọn lọc, như thạch SS, xylo agar, lysine deoxycholate (XLD) ), thạch Hektoen ruột (HE) và agar sáng xanh, trong số những loại khác.

Đã gieo

Đối với mẫu phân lấy 1 g mẫu và huyền phù trong ống có 10 đến 15 ml nước dùng selenite. Nếu phân là chất lỏng, lấy 1 ml và đình chỉ trong nước dùng. Đối với gạc trực tràng, xả vật liệu gạc vào nước dùng.

Trong các mẫu thực phẩm rắn lấy 1 gr và huyền phù trong nước dùng selenite.

Trong thực phẩm lỏng trộn thành các phần bằng nhau với nước dùng selenite ở nồng độ gấp đôi.

Đối với máy ly tâm mẫu nước tiểu, loại bỏ phần nổi phía trên, lấy tất cả cặn và đình chỉ trong nước dùng selenite.

Nước dùng được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ ủ. Sự tăng trưởng của vi khuẩn được chứng minh bằng độ đục. Một ống bổ sung cho mỗi mẫu cũng có thể được đưa vào để ủ ở 42 ° C. Sau đó, gieo phương tiện rắn chọn lọc từ môi trường selenite.

Kiểm soát chất lượng

Để kiểm soát độ vô trùng, nước dùng selenite từ mỗi mẻ mà không cần tiêm được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ. Dự kiến ​​không có độ đục, hoặc thay đổi màu sắc của môi trường.

Để kiểm soát hoạt động tốt của môi trường, các chủng đã biết có thể được sử dụng, chẳng hạn như:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 và Proteus mirabilis ATCC 43071.

Kết quả dự kiến ​​là:

  • Đối với ba chủng vi khuẩn đầu tiên, sự tăng trưởng phải đạt yêu cầu.
  • Để Escherichia coli ức chế một phần.
  • Đối với Proteus tăng trưởng vừa phải.

Hạn chế

Nước dùng selenite trung bình gây độc cho da người, do đó nên tránh tiếp xúc trực tiếp.

Tài liệu tham khảo

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarittle M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. So sánh giữa môi trường nuôi cấy natri selenite và tetrathionate natri, cả hai được ủ ở 37 ° C và 42 ° C cho sự cô lập của Salmonella phân của người mang. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Phòng thí nghiệm Britania. Selenito Caldo. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  3. Phòng thí nghiệm Neogen Nước dùng Selenito Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Phân lập vi sinh Salmonella spp. và các công cụ phân tử để phát hiện nó. Sức khỏe, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Có sẵn từ: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.