Nước dùng đậu nành tripticaseína nền tảng, chuẩn bị và sử dụng

các nước tương đậu nành tripticaseína Nó là một môi trường nuôi cấy lỏng, rất bổ dưỡng và không chọn lọc. Do tính linh hoạt tuyệt vời của nó, nó là một trong những môi trường nuôi cấy lỏng được sử dụng rộng rãi nhất trong phòng thí nghiệm vi sinh.

Nó còn được gọi là đậu nành tripticasa hoặc casein-đậu nành tiêu hóa, có tên viết tắt là TSB cho từ viết tắt bằng tiếng Anh Tôi cố gắng Nước dùng hoặc CST cho từ viết tắt của nó trong tiếng Tây Ban Nha. Công dụng của nó rất đa dạng do thành phần của nó. Nó bao gồm triptein, peptone đậu nành, natri clorua, kali photphat và glucose.

Nó có khả năng sinh sản các vi khuẩn gây bệnh quan trọng trên lâm sàng, bao gồm cả những vi khuẩn có nhu cầu dinh dưỡng và vi khuẩn kỵ khí. Một số nấm và chất gây ô nhiễm cơ hội cũng có thể phát triển trong môi trường này.

Do sức mạnh dinh dưỡng cao, nó có độ nhạy cao để phát hiện ô nhiễm vi khuẩn, vì lý do này, nó đã được Dịch vụ Kiểm tra Sức khỏe Thực vật và Thực vật USDA chọn để phân tích vắc-xin vi sinh..

Tương tự như vậy, súp đậu nành tripticase đáp ứng các yêu cầu của các dược điển khác nhau (EP Châu Âu, JP Nhật Bản và USP Bắc Mỹ) cho nghiên cứu vi sinh của các sản phẩm ở cấp độ công nghiệp, như mỹ phẩm và thực phẩm.

Mặt khác, điều đáng nói là mặc dù tiện ích tuyệt vời của nó, phương tiện này tương đối rẻ tiền, vì vậy nó có giá cả phải chăng cho hầu hết các phòng thí nghiệm vi sinh. Nó cũng rất dễ dàng để chuẩn bị.

Chỉ số

• 1 nền tảng
• Chuẩn bị 2
  • 2.1 Đậu tương trypticamine
  • 2.2 -Các biến thể của nước dùng đậu nành tripticasein
• 3 Sử dụng
• 4 hạt giống
• 5 Kiểm soát chất lượng
• 6 hạn chế
• 7 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Tripteína, peptone và glucose cung cấp cho anh ta các đặc tính dinh dưỡng thiết yếu để biến nó thành một môi trường lý tưởng cho sự phát triển vi khuẩn nhanh.

Khoảng 6 đến 8 giờ ủ có thể thấy sự tăng trưởng ở hầu hết các vi sinh vật. Tuy nhiên, có những chủng phát triển chậm có thể kéo dài trong nhiều ngày để phát triển.

Natri clorua và kali photphat hoạt động như trạng thái cân bằng thẩm thấu và điều chỉnh pH, ​​tương ứng. Sự hiện diện của tăng trưởng được chứng minh bằng sự xuất hiện của độ đục trong môi trường; nếu không có sự tăng trưởng thì môi trường vẫn trong mờ.

Do màu sáng của nó, có thể quan sát quá trình sản xuất các sắc tố, chẳng hạn như màu sắc được hiển thị trong hình ảnh ở đầu bài viết, tương ứng với sắc tố được tạo ra bởi Pseudomonas aeruginosa. 

Chuẩn bị

-Nước dùng đậu tương tryptic

Để chuẩn bị nước dùng đậu nành tripticase, cân 30 gram môi trường thương mại khử nước trên quy mô kỹ thuật số. Sau đó, nó hòa tan trong một lít nước cất chứa trong một fiola.

Hỗn hợp này được để yên trong 5 phút và sau đó được đưa đến nguồn nhiệt để hỗ trợ quá trình hòa tan môi trường. Nó nên được lắc thường xuyên trong khi đun sôi trong 1 phút.

Sau khi hòa tan, nó được phân phối trong các ống có kích thước phù hợp khi cần thiết. Có thể sử dụng ống có đầu cắm bằng bông hoặc mũ bakelite. Sau đó, các ống được khử trùng bằng môi trường trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Độ pH của môi trường phải là 7,3 ± 0,2

Cần lưu ý rằng màu của môi trường nuôi cấy mất nước là màu be nhạt và nên được bảo quản ở 10 đến 35 ° C, ở nơi khô ráo. Trong khi nước dùng được chuẩn bị có màu hổ phách nhẹ và nên được bảo quản trong tủ lạnh (2 đến 8 ° C).

-Biến thể của nước dùng đậu nành tripticasein

Nước dùng đậu nành biến đổi trypticamine có thể được chuẩn bị bằng cách thêm muối mật và novobiocin để làm cho nó được chọn lọc để phân lập E.coli. Một lựa chọn khác cho cùng mục đích là chuẩn bị nước dùng đậu nành tripticase bổ sung vancomycin, cefixime và Tellurite (2,5 μg / ml).

Mặt khác, có thể thêm nhiều glucose (0,25%) vào nước dùng đậu nành trypticasein khi mục tiêu là kích thích hình thành màng sinh học.

Sử dụng

Nó đủ dinh dưỡng để cho phép sự phát triển của các vi khuẩn đòi hỏi hoặc gây phiền nhiễu như Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp và Brucella sp, không cần bổ sung máu hoặc huyết thanh.

Tương tự như vậy, một số loại nấm có thể phát triển trong nước dùng này, chẳng hạn như Candida albicans phức tạp, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Ngoài ra, môi trường này trong điều kiện yếm khí là lý tưởng để phục hồi vi khuẩn thuộc chi Clostridium, cũng như vi khuẩn không kỵ khí có tầm quan trọng lâm sàng..

Nếu thêm 6,5% natri clorua có thể được sử dụng cho sự phát triển của Enterococcus và Streptococcus Nhóm D khác.

Ở cấp độ nghiên cứu, nó rất hữu ích trong các giao thức khác nhau, đặc biệt là trong nghiên cứu vi khuẩn hình thành màng sinh học hoặc màng sinh học. Nó cũng được sử dụng để chuẩn bị huyền phù vi khuẩn ở 0,5% Mac Farland cần thiết để thực hiện kháng sinh đồ bằng phương pháp Kirby và Bauer.

Trong trường hợp này, 3 đến 5 khuẩn lạc có hình dạng tương tự được lấy và nhũ hóa trong 4-5 ml nước dùng đậu nành trypticasein. Sau đó nó được ủ trong 2 đến 6 giờ ở 35-37 ° C và sau đó được điều chỉnh theo nồng độ mong muốn bằng nước muối vô trùng. Không nên sử dụng nước dùng đậu nành trypticase trong 18 đến 24 giờ ủ.

Đã gieo

Mẫu có thể được gieo trực tiếp hoặc cấy các khuẩn lạc thuần chủng được lấy từ môi trường chọn lọc. Cấy phải nhỏ để không làm mờ môi trường trước khi ủ.

Thông thường ủ ở 37 ° C trong aerobiosis trong 24 giờ, nhưng những điều kiện này có thể thay đổi tùy thuộc vào vi sinh vật được tìm kiếm. Nó cũng có thể được ủ trong điều kiện yếm khí ở 37 ° C trong vài ngày nếu cần thiết. Ví dụ, trong các vi sinh vật đòi hỏi hoặc tăng trưởng chậm có thể được ủ đến 7 ngày.

Trong phân tích vi sinh của các dược phẩm - giống như vắc-xin - các giao thức chặt chẽ hơn. Trong những trường hợp này, nước dùng không tăng trưởng sẽ không bị loại bỏ cho đến khi đạt được 14 ngày ủ liên tục.

Kiểm soát chất lượng

Đối với mỗi lô được chuẩn bị, nên ủ 1 hoặc 2 ống mà không cần tiêm để chứng minh tính vô trùng. Nó phải không thay đổi.

Bạn cũng có thể trồng các chủng đã biết để đánh giá hành vi của chúng. Trong số các chủng có thể được sử dụng là:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus Subilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 hoặc 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Trong mọi trường hợp, sự tăng trưởng phải thỏa đáng trong các điều kiện khí quyển và nhiệt độ phù hợp với từng vi sinh vật.

Hạn chế

-Sự lên men của glucose gây ra sự giảm độ pH của môi trường do sản xuất axit. Điều này có thể không thuận lợi cho sự sống sót của một số vi sinh vật nhạy cảm với axit.

-Không khuyến khích duy trì các chủng, vì ngoài tính axit, vi khuẩn sau một vài ngày làm cạn kiệt các chất dinh dưỡng với sự tích tụ của các chất độc hại làm cho môi trường không thể sống được.

-Chăm sóc phải được thực hiện trong tất cả các giao thức vô trùng, vì nước dùng dễ bị ô nhiễm.

-Sau khi chuẩn bị nước dùng tripticasein, đừng cố chuyển nước dùng sang một ống vô trùng khác, vì loại thao tác này rất dễ bị nhiễm bẩn.

Tài liệu tham khảo

1. Cona E. Điều kiện để nghiên cứu tính mẫn cảm tốt bằng xét nghiệm khuếch tán agar. Rev. nhiễm trùng 2002; 19 (2): 77-81. Có sẵn tại: scielo.org
2. Phòng thí nghiệm Anh Nước dùng tryteine ​​đậu nành. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
3. Phòng thí nghiệm MCD. Nước dùng đậu nành Trytica. Có sẵn tại: Electronic-systems.com
4. Phòng thí nghiệm Neogen. Đậu nành Triptych. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Đánh giá về kỹ thuật miễn dịch từ tính để phục hồi Escherichia coli O157: H7 trong kem sữa. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Có sẵn tại: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm hình thành Staphylococcus aureus theo tính nhạy cảm với kháng sinh và xuất xứ lâm sàng. Sơ qua năm 2015; 62 (1): 1-8. Có sẵn tại: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Cô lập Escherichia coli O157: H7 trong các mẫu phân của gia súc bò mục đích kép từ thành phố Miranda, bang Zulia, Venezuela. Mục sư. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Có sẵn tại: scielo.org