Nền tảng nước dùng urê, chuẩn bị và sử dụng

các nước dùng urê là một môi trường nuôi cấy lỏng, được sử dụng để chứng minh sự hiện diện của enzyme urease ở một số vi sinh vật. Ureas là một enzyme của vi sinh vật được sản xuất một cách cấu thành, nghĩa là nó được tổng hợp độc lập với việc chất nền có hoạt động hay không.

Chức năng của urease liên quan đến sự phân hủy các hợp chất hữu cơ. Không phải tất cả các vi sinh vật đều có thể tổng hợp enzyme này, do đó việc xác định nó trong phòng thí nghiệm cho phép xác định một số chủng vi khuẩn nhất định và thậm chí phân biệt giữa các loài cùng chi..

Có hai loại xét nghiệm urê: Stuart và Christensen. Họ khác nhau về thành phần và độ nhạy cảm của họ. Đầu tiên là đặc biệt cho thấy một lượng lớn urease được sản xuất bởi các loài thuộc chi Proteus.

Thứ hai là nhạy cảm hơn và có thể phát hiện một lượng nhỏ urease được tạo ra muộn bởi các giống vi khuẩn khác, chẳng hạn như Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter và Mycobacterium.

Nước canh urê Stuart bao gồm urê, natri clorua, kali photphat, monopotosphat photphat, chiết xuất men, đỏ phenol và nước cất.

Trong đó nước dùng Christensen hoặc agar urê bao gồm pepton, natri clorua, monopotosphat, glucose, urê, đỏ phenol, nước cất và agar-agar. Cái sau chỉ khi nó là môi trường rắn.

Chỉ số

• 1 nền tảng
  • 1.1 Nước dùng urê Stuart
  • 1.2 Nước dùng Christensen hoặc urê agar
  • 1.3 Giải thích cả hai phương tiện truyền thông (Stuart và Christensen)
• Chuẩn bị 2
  • 2.1 Nước dùng urê Stuart
  • 2.2 Nước dùng Christensen hoặc urê agar
• 3 công dụng
• 4 Gieo thử urê
• 5 Kiểm soát chất lượng
• 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Enzyme urease thủy phân urê tạo thành carbon dioxide, nước và hai phân tử amoniac. Các hợp chất này phản ứng tạo thành sản phẩm cuối cùng được gọi là amoni carbonate.

Nước dùng urê Stuart

Nước dùng urê Stuart được đệm nhiều hơn với độ pH 6,8. Do đó, vi sinh vật phải có khả năng tạo thành một lượng lớn amoni để chuyển sang màu đỏ thành phenol. Độ pH phải tăng trên 8.

Do đó, môi trường urê Stuart được chọn lọc cho các loài Proteus, cho kết quả dương tính trong 24 đến 48 giờ ủ và không hiệu quả đối với vi khuẩn sản xuất một lượng urease thấp hoặc làm chậm quá trình thủy phân urê.

Điều này là do các loài Proteus có thể sử dụng urê làm nguồn nitơ. Ngược lại, các vi khuẩn sản xuất urease khác cần một nguồn bổ sung.

Tuy nhiên, Pérez et al. (2002) đã xác định rằng nước dùng urê Stuart có hiệu quả tương đương với urê agar từ Christensen, để xác định urease trong các chủng nấm men của chi Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon và Saccharomyces..

Các tác giả của nghiên cứu tuyên bố đã đạt được 100% sự trùng hợp với cả phương tiện truyền thông (Stuart và Christensen) bằng cách ủ trong 24 và 48 giờ; làm cho điều đó trở nên tích cực đối với các chủng có khả năng biến môi trường thành màu hồng fuchsia mạnh mẽ.

Việc làm rõ này là cần thiết, vì Lodder (1970) đã khẳng định rằng hầu như tất cả các loại men đều có thể đặt vát urê agar của Christensen thành màu hồng nhạt. Điều này là do chúng có thể thủy phân urê với số lượng tối thiểu, và sự hình thành các amin bằng cách khử carboxyl oxy hóa của các axit amin trên bề mặt. Điều này không nên được hiểu là tích cực.

Nước dùng hoặc urê agar từ Christensen

Christensen urea hoặc agar ít được đệm, có thể phát hiện một lượng nhỏ amoni. Ngoài ra, phương tiện này được làm giàu với pepton và glucose. Các hợp chất này làm cho các vi sinh vật sản xuất urease khác không phát triển trong môi trường Stuart phát triển.

Tương tự như vậy, xét nghiệm urea Christensen cho kết quả nhanh hơn, đặc biệt là đối với Proteus, có thể cho kết quả dương tính mạnh mẽ trong ít nhất 30 phút với thời gian tối thiểu và tối đa 6 giờ trong thời gian tối đa.

Phần còn lại của vi sinh vật sản xuất urease quản lý để chuyển màu của môi trường một chút sau 6 giờ, và mạnh mẽ sau 24, 48, 72 giờ trở lên, và thậm chí một số chủng có thể cho phản ứng yếu sau 5 hoặc 6 ngày.

Giải thích cả hai phương tiện truyền thông (Stuart và Christensen)

Môi trường ban đầu có màu vàng cam và phản ứng dương tính sẽ chuyển màu của môi trường sang màu hồng-fuchsia. Cường độ của màu tỷ lệ thuận với lượng amoni được tạo ra.

Một phản ứng tiêu cực sẽ rời khỏi môi trường của màu gốc ngoại trừ các loại men, có thể tạo ra màu hồng nhạt với agar Christensen urea.

Chuẩn bị

Nước dùng urê Stuart

Cân gram cần thiết theo chỉ dẫn của nhà thương mại. Hòa tan trong nước cất tốt nhất là vô trùng. Không sử dụng nhiệt để hòa tan, vì urê rất nhạy cảm với nhiệt.

Phương pháp lọc màng được sử dụng để khử trùng. Đối với điều này, một bộ lọc Millipore có lỗ chân lông có đường kính 0,45 is được sử dụng. Không sử dụng nồi hấp. Sau khi dung dịch được lọc, nó được phân phối trong các ống vô trùng. Để có được kết quả đáng tin cậy, nó phải được chuyển từ 1,5 ml với số lượng tối thiểu thành 3 ml với lượng tối đa trên mỗi ống..

Lưu trữ trong tủ lạnh và ủ trước khi sử dụng.

Nếu phương pháp lọc không có sẵn, nên sử dụng phương tiện ngay lập tức để thu được kết quả đáng tin cậy.

Một cách khác để chuẩn bị nước dùng urê Stuart như sau:

Một số nhà thương mại bán một nửa cơ sở cho thử nghiệm urê, không bao gồm urê.

Số tiền được chỉ định bởi nhà thương mại được cân. Nó được hòa tan trong nước cất và khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Để yên một chút và khi môi trường ấm, thêm 100 ml dung dịch urê đã chuẩn bị ở mức 20% và khử trùng bằng cách lọc.

Nó được phân phối trong các ống vô trùng, như được mô tả trước đây.

Nước dùng hoặc urê agar từ Christensen

-Chuẩn bị dung dịch urê

Cân 29 gram urê đã khử nước và hòa tan trong 100 ml nước cất. Sử dụng phương pháp lọc để khử trùng. Không hấp.

-Agar cơ sở thạch

Hòa tan 24 g môi trường thạch khử nước trong 950 ml nước cất. Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Để yên cho đến khi nó đạt đến nhiệt độ 50 ° C và thêm urê đã chuẩn bị trước đó vô trùng.

Đổ 4 đến 5 ml vào các ống vô trùng và nghiêng cho đến khi đông đặc. Cần có một đỉnh sáo dài.

Phương tiện này cũng có thể được chuẩn bị ở dạng lỏng.

Công dụng

Xét nghiệm urê cực kỳ hiệu quả trong việc phân biệt chi Proteus với các chi khác của họ Enterobacteriaceae, do phản ứng nhanh do Proteus cung cấp.

Nếu thành phần của Christensen được sử dụng, thử nghiệm giúp phân biệt giữa các loài cùng chi. Ví dụ, S. haemolyticus và S. warneri strên Tụ cầu khuẩn coagulase âm tính và betahemolytic, nhưng họ khác nhau ở chỗ S. haemolyticus nó là urê âm tính và S. warneri nó là urê dương.

Mặt khác, McN Khoa đã sử dụng thành công nước dùng urê Christensen 2% để nghiên cứu sự hiện diện của Vi khuẩn Helicobacter pylori trong các mẫu sinh thiết lấy từ niêm mạc dạ dày (vùng antral).

Sự hiện diện của H. pylori nó được chứng minh bằng xét nghiệm urê dương tính. Thời gian quan sát kết quả tỷ lệ thuận với lượng vi sinh vật có mặt.

Có thể thấy, đây là một phương pháp đơn giản để chẩn đoán Vi khuẩn Helicobacter pylori trong sinh thiết dạ dày.

Cuối cùng, xét nghiệm này cũng hữu ích để phân biệt các loài thuộc chi Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus và Mycobacteria.

Gieo thử urê

Hai phương pháp đòi hỏi một chủng vi sinh vật mạnh để tối ưu hóa kết quả. Các khuẩn lạc vi khuẩn tốt nhất là được lấy từ agar máu và nấm men Sabouraud, với một số trường hợp ngoại lệ. Chất cấy được nhũ hóa trong môi trường lỏng.

Đối với môi trường urê Stuart được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ, biết rằng người ta chỉ tìm kiếm các chủng của chi Proteus khi chủng là vi khuẩn. Đối với nấm men, nó có thể được ủ ở 37 ° C hoặc ở nhiệt độ phòng trong 24 đến 48 giờ ủ.

Trong trường hợp nước dùng Christensen urê, ủ ở 37 ° C trong 24 giờ. Nếu xét nghiệm âm tính, nó có thể được ủ trong tối đa 6 ngày. Nếu xét nghiệm dương tính trước 6 giờ, nó chỉ ra rằng đó là một chủng thuộc chi Proteus.

Trong trường hợp của Christensen urea agar, vát agar được tiêm mạnh, không bị thủng. Nước dùng được ủ và giải thích theo cùng một cách.

Kiểm soát chất lượng

Các chủng đối chứng có thể được sử dụng để kiểm tra môi trường, như Proteus mirabilis ATCC 43071, Viêm phổi do Klebsiella  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 và Salmonella typhimurium.  Hai kết quả đầu tiên phải cho kết quả dương tính và hai kết quả âm tính cuối cùng.

Tài liệu tham khảo

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Sử dụng nước canh urê Stuart cho xét nghiệm urease, như một xét nghiệm trong chẩn đoán nấm men. Mục sư Sóc. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Có sẵn tại: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Tái bản lần 3 Biên tập Panamericana. Thủ đô Argentina.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Tái bản lần thứ 5 Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
5. Phòng thí nghiệm Britania. Christensen Medio (cơ sở thạch Urea) 2015. Có sẵn tại: britanialab.com