Nền tảng nước dùng Tetrathionate, chuẩn bị và sử dụng

các nước dùng tetration hoặc nước canh TT là môi trường nuôi cấy lỏng chọn lọc để làm giàu và phục hồi các chủng Salmonella. Nó được tạo ra bởi Müeller và sau đó được sửa đổi bởi Kauffmann, vì lý do đó có những người gọi nó là nhà thổ Müeller-Kauffmann.

Môi trường ban đầu chứa proteose pepton, canxi cacbonat và natri thiosulfate. Kauffmann đã thêm muối mật và tạo ra một phương thức khác với màu xanh lá cây tươi sáng. Những chất này ức chế sự phát triển của coliforms, để lại môi trường tự do cho sự phát triển của vi khuẩn gây bệnh, trong trường hợp này là Salmonella.

Việc sửa đổi rất thành công vì nó làm tăng đáng kể độ nhạy của môi trường. Do đó, hiện tại nó rất hữu ích cho việc tìm kiếm Salmonellas trong bất kỳ loại mẫu nào, nhưng đặc biệt đối với phân rắn và thực phẩm và chất lỏng..

Chuẩn bị của nó bao gồm hai giai đoạn; môi trường thương mại là cơ sở để chuẩn bị nước dùng tetrathionate, và sau đó cho tetrathionate được hình thành, một dung dịch iốt iốt được thêm vào để hoàn thành môi trường.

Hiệp hội Y tế Công cộng Hoa Kỳ (APHA) khuyến nghị sử dụng nước dùng tethionate bổ sung màu xanh lá cây tươi sáng để làm giàu mẫu tìm kiếm Salmonella, vì nó được lựa chọn nhiều hơn so với nước dùng tetrathionate và nước dùng selenite.

Nói chung, nước dùng tetrathionate là lý tưởng khi vi khuẩn thuộc chi Salmonella bị nghi ngờ với số lượng nhỏ hoặc bị lạm dụng do tiếp xúc với các chất ức chế hoặc bởi các quy trình công nghiệp làm giảm thiểu khả năng sống sót của chúng.

Chỉ số

• 1 nền tảng
• Chuẩn bị 2
  • 2.1 - Tetrathionate
  • 2.2 -Variante tetrathionate canh với màu xanh lá cây tươi sáng
• 3 Sử dụng
• 4 Kiểm soát chất lượng
• 5 khuyến nghị
• 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Các pepton hiện tại tương ứng với tiêu hóa tụy casein và tiêu hóa mô của động vật. Chúng cung cấp nguồn carbon, nitơ và chất dinh dưỡng nói chung cho sự phát triển của vi khuẩn.

Về phần mình, natri thiosulfate phản ứng với dung dịch iốt tạo thành tetrathionate. Điều này ức chế sự phát triển của coliforms và tạo điều kiện cho sự phát triển của vi khuẩn có chứa enzyme tetrathionate reductase, trong số đó là chi Salmonella, nhưng cũng là Proteus.

Muối mật cũng hoạt động như một chất ức chế của hầu hết các vi khuẩn gram dương và một số vi khuẩn gram âm (coliforms).

Canxi cacbonat hấp thụ các chất độc hại được tạo ra bởi sự phân hủy tetrathionate, tạo thành axit sunfuric. Theo nghĩa này, canxi cacbonat trung hòa độ axit duy trì độ pH của môi trường ổn định.

Trong trường hợp phương thức màu xanh lá cây tươi sáng, chất này làm tăng sức mạnh chọn lọc của nước dùng tetrathionate bằng cách ức chế các vi sinh vật khác ngoài chi Salmonella..

Chuẩn bị

-Nước canh

Dung dịch iốt iốt

Cân:

• 6 gr iốt.
• 5 gr kali iodua.

Kali iodide được hòa tan trong khoảng 5 ml nước cất vô trùng, sau đó iốt được thêm từng chút một trong khi hỗn hợp được đun nóng. Sau khi hòa tan hoàn toàn, nó được đổ đầy nước cất vô trùng cho đến khi đạt đến thể tích cuối cùng là 20 ml.

Một nửa cơ sở cho nước dùng tetrathionate

Cân 46 gram môi trường khử nước và đình chỉ trong 1 lít nước cất vô trùng. Trộn và đun nóng cho đến khi hòa tan hoàn toàn, nó có thể sôi chỉ trong vài phút. Không khử trùng trong nồi hấp. Cơ sở của môi trường được làm mát đến khoảng 45 ° C và tại thời điểm đó, 20 ml dung dịch iốt được thêm vào..

Sau khi thêm dung dịch iodurada vào môi trường nên sử dụng ngay. Nếu bạn không muốn sử dụng toàn bộ hỗn hợp, hãy tiến hành như sau:

10 ml môi trường cơ sở được phân phối trong các ống và chỉ 0,2 ml dung dịch iốt được thêm vào các mẫu được cấy với mẫu..

Những thứ không được sử dụng vẫn có thể được lưu trữ trong tủ lạnh, tuy nhiên, vì môi trường không được khử trùng, lý tưởng là chuẩn bị số lượng chính xác cần thiết..

Màu của môi trường trước khi thêm dung dịch iốt iốt có màu trắng đục với kết tủa trắng và sau khi thêm nó có màu nâu với kết tủa đậm đặc. Kết tủa quan sát là bình thường và tương ứng với canxi cacbonat không hòa tan. Độ pH cuối cùng của môi trường là 8.4 ± 0.2.

-Biến thể nước dùng Tetrathionate với màu xanh lá cây tươi sáng

Để chuẩn bị nước dùng tetrathionate với màu xanh lá cây tươi sáng, tất cả các bước được mô tả ở trên được thực hiện, nhưng ngoài ra, 10 ml dung dịch màu xanh lá cây tươi sáng được chuẩn bị ở mức 0,1% sẽ được thêm vào hỗn hợp..

Màu xanh lá cây tươi sáng

Giải pháp này được chuẩn bị như sau:

Cân 0,1 g màu xanh lá cây tươi sáng và đình chỉ trong 100 ml nước cất. Đun cho đến khi sôi để đạt được sự hòa tan hoàn toàn. Lưu trong chai hổ phách.

Sử dụng

Đối với mẫu phân (nuôi cấy phân), giao thức như sau:

Cấy 1 g phân rắn hoặc 1 ml phân lỏng trong ống với 10 ml nước dùng tetrathionate sẵn sàng sử dụng. Lắc mạnh và ủ trong aerobiosis ở 43 ° C trong 6-24 giờ.

Sau đó, lấy một lượng từ 10 đến 20 μl nước dùng và nuôi cấy nó trong môi trường chọn lọc trung bình cho Salmonella, như thạch SS, agar XLD, agar xanh tươi, thạch thạch Hektoen, trong số những loại khác..

Song song, môi trường chọn lọc đối với Salmonella nên được tiêm với mẫu trực tiếp (phân) mà không cần làm giàu. Đối với các mẫu của gạc trực tràng, tải xuống các tài liệu thu thập trong ống và tiến hành như mô tả ở trên.

Đối với các mẫu thực phẩm, cân 10 g thức ăn đặc hoặc 10 ml thức ăn lỏng và cấy vào chai với 100 ml nước dùng tetrathionate sẵn sàng để sử dụng. Tiến hành theo cách tương tự như mô tả ở trên nhưng ủ ở 37 ° C.

Có thể thấy, mối quan hệ giữa mẫu và nước dùng sẽ luôn là 1:10.

Kiểm soát chất lượng

Để kiểm tra môi trường nuôi cấy, các chủng đối chứng đã biết có thể được sử dụng. Được sử dụng phổ biến nhất là các chủng được chứng nhận ATCC.

Các chủng được sử dụng là Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 và Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Đối với các chủng Salmonella, một sự phát triển tuyệt vời được mong đợi, trong khi Escherichia coli có thể có sự phát triển yếu hoặc thường xuyên và các chủng Gram dương (Enterococcus và Staphylococcus) bị ức chế một phần hoặc hoàn toàn.

Khuyến nghị

-Vì môi trường này không ức chế sự phát triển của Proteus, một số phòng thí nghiệm sử dụng 40 mg / L novobiocin để ngăn chặn sự phát triển của chủng vi khuẩn này. Nên bổ sung kháng sinh trước khi dung dịch iốt iốt.

-Sau khi chuẩn bị môi trường bao gồm dung dịch iốt iốt, không nên quá 2 giờ sau khi tiêm.

-Tại thời điểm phân phối môi trường trong các ống, hỗn hợp phải được đồng nhất hóa liên tục để nối lại kết tủa đã hình thành.

-Trong các mẫu ít bị ô nhiễm, nước dùng tetrathionate được ủ ở 35-37 ° C, và trong các mẫu bị ô nhiễm cao, nên ủ ở 43 ° C..

Tài liệu tham khảo

1. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Năm 2010, cơ sở nước dùng tetrathionate theo Müeller-Kauffmann. Có sẵn trong:
2. Phòng thí nghiệm BD 2003. Cơ sở nước dùng Tetrathionate. Có sẵn trong:
3. Phòng thí nghiệm Britania. 2015. Cơ sở nước dùng Tethionate. Có sẵn trong:
4. Truyền thông BBL. 2005. Chuẩn bị ống cho việc trồng các loài Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarittle M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. So sánh giữa môi trường nuôi cấy natri selenite và tetrathionate natri, cả hai được ủ ở 37 ° C và 42 ° C cho sự cô lập của Salmonella spp của phân tàu sân bay. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220