Chia sẻ:
Stain bởi May Grünwald-Giemsa nền tảng, kỹ thuật và sử dụng
các Có thể nhuộm Grünwald-Giemsa o Pappenheim là một kỹ thuật tạo màu khác biệt pha trộn thuốc thử Giemsa và May Grünwald. Nó được sử dụng để phân biệt các tế bào máu bình thường và bất thường trong phết tế bào máu ngoại biên và tủy xương, cũng như nhuộm các phần mô học và mẫu tế bào học.
Cả hai thuốc thử - Gemsa và May Grünwald - có nguồn gốc từ nhuộm kiểu Romanowsky, một kỹ thuật dựa trên sự kết hợp giữa axit và thuốc nhuộm cơ bản.
Giemsa đã cải tiến kỹ thuật bằng cách ổn định hỗn hợp eosin, xanh methylen và các dẫn xuất của nó, với glycerol. Ngược lại, May Grünwald sử dụng eosin và xanh methylen, sử dụng metanol làm dung môi. Sự kết hợp chiến lược này đã cho kết quả tuyệt vời.
Mặc dù về mặt quan sát hình thái tế bào hoạt động tương tự như màu sắc của Giemsa và Wright, kỹ thuật này cải thiện những cái trước bằng cách tinh chỉnh màu sắc của ký sinh trùng gây bệnh sốt rét, bệnh Chagas, bệnh leishmania và bệnh trichomonas.
Ngoài ra, nó đã được chứng minh là một kỹ thuật rất hữu ích cho nghiên cứu tế bào học về chất lỏng tinh trùng. Nó đã được làm nổi bật không chỉ bằng cách hiển thị các đặc điểm hình thái của tinh trùng, mà còn cho phép phân biệt với bạch cầu hiệu quả lớn, tế bào biểu mô và tế bào sinh tinh trùng.
Chỉ số
- 1 nền tảng
- 1.1 Các loại thuốc nhuộm
- 2 Kỹ thuật
- 2.1 Vật liệu
- 2.2 Dung dịch nhuộm đậm đặc May Grünwald
- 2.3 Thuốc nhuộm Giemsa đậm đặc
- 2.4 Chuẩn bị dung dịch đệm ở pH 7.2
- 2.5 Phẫu thuật nhuộm máu hoặc nhuộm tủy xương
- 2.6 Kỹ thuật tạo màu mở rộng của dịch tinh trùng
- 2.7 Thông số kỹ thuật quan trọng
- 3 công dụng
- 3.1 Tế bào học âm đạo
- 3.2 Mẫu tinh trùng
- 4 tài liệu tham khảo
Nền tảng
Kỹ thuật này dựa trên nền tảng của vết bẩn của Romanowsky, trong đó thuốc nhuộm axit có ái lực chọn lọc đối với các thành phần cơ bản của tế bào và các thành phần axit thu hút các thuốc nhuộm cơ bản.
Giải thích theo một cách khác, cả cấu trúc tế bào và thuốc nhuộm đều có điện tích dương hoặc âm; phí bằng nhau đẩy lùi và thu phí khác nhau.
Ví dụ, các thuốc nhuộm cơ bản như xanh methylen được tích điện dương và bị thu hút bởi các cấu trúc tích điện âm. Đó là lý do tại sao thuốc nhuộm này nhuộm các hạt nhân giàu DNA và RNA có các nhóm phosphate tích điện âm.
Các hạt của basophils và tế bào chất phân đoạn của các tế bào bạch cầu đơn nhân có chứa RNA cũng được nhuộm.
Tương tự như vậy, thuốc nhuộm axit mang điện tích âm, đó là lý do tại sao nó tham gia các cấu trúc tích điện dương như hồng cầu và các hạt của bạch cầu ái toan phân đoạn. Đối với các hạt của bạch cầu trung tính phân đoạn, chúng khắc phục cả hai thuốc nhuộm.
Nhiều loại chất màu
Trong kỹ thuật này, sự kết hợp của các phản ứng giữa thuốc nhuộm orthochromatic và metachromatics cùng tồn tại. Orthochromatics (eosin và methylene blue) liên kết với cấu trúc tế bào mà chúng có liên quan và cung cấp màu sắc ổn định không thay đổi.
Mặt khác, metachromatics (dẫn xuất của methylene blue azure A và azure B), thay đổi màu sắc ban đầu của chúng một khi chúng được gắn với cấu trúc cụ thể, và thậm chí có thể có nhiều sắc thái khác nhau.
Cuối cùng, bước thực hiện bởi giải pháp May Grünwald cần có sự hiện diện của nước, bởi vì không có nó, thuốc nhuộm sẽ thấm vào các cấu trúc nhưng sẽ không được cố định. Để điều này xảy ra, thuốc nhuộm phải trở thành cực hoặc ion hóa, và do đó có thể kết tủa và gắn vào các cấu trúc liên quan.
Kỹ thuật
Vật liệu
- Slide cho slide.
- Cầu màu.
- Giải pháp của May-Grünwald.
- Vết bẩn Giemsa.
- Nước cất.
Dung dịch nhuộm đậm đặc May Grünwald
Chúng ta phải cân 0,25 g màu xanh eosin-methylene (thuốc nhuộm theo May Grünwald) và hòa tan trong 100 ml metanol. Hỗn hợp này sau đó được trộn trong 1 giờ và để yên trong 24 giờ. Kết thúc thời gian, nó lọc.
Để áp dụng kỹ thuật này, thuốc nhuộm May Grünwald phải được pha loãng như sau: cho 200 ml thuốc nhuộm pha loãng, 30 ml dung dịch đậm đặc được đo, 20 ml dung dịch đệm và 150 ml nước cất được điều chỉnh theo pH7,2-7,3 được thêm vào. . Sau đó, nó được trộn và lọc.
Thuốc nhuộm Giemsa đậm đặc
Cân 0,5 g azur-eosin-methylene xanh (thuốc nhuộm theo Giemsa), hòa tan trong 50 ml metanol và đặt 50 ml glycerin vào hỗn hợp.
Để thực hiện kỹ thuật, pha loãng 1:10 với dung dịch đệm và để yên trong 10 phút. Nó có thể được lọc nếu cần thiết.
Chuẩn bị dung dịch đệm ở pH 7,2
Chúng phải được cân nhắc:
- 40 mg kali di-hydro photphat (KH2PO4).
- 151 mg di-natri hydro photphat 12-hydrat (Na2HPO4).
Cả hai hợp chất được hòa tan trong 100 ml nước.
Thủ tục nhuộm máu hoặc nhuộm tủy xương
Có hai phương thức: cổ điển và nhanh.
Chế độ cổ điển
- Che vết bẩn trong 2 hoặc 3 phút bằng dung dịch May-Grünwald pha loãng.
- Rửa bằng nước cất đệm để loại bỏ dung dịch trước đó.
- Che với cùng một dung dịch rửa đệm và để trong 1 phút. Ý tưởng là thuốc nhuộm trước đó được cố định vào các cấu trúc và đồng thời, các tế bào được hydrat hóa.
- Thêm 12 giọt cồn Giemsa pha loãng vào nước đệm và thổi để trộn và đồng nhất hóa. Để yên trong 15 hoặc 20 phút.
- Rửa vết bẩn bằng nước cất đệm và để khô.
- Tập trung và quan sát trong kính hiển vi quang học các tế bào máu nhuộm màu bằng vật kính 40X. Nếu cần thiết, 100X có thể được sử dụng.
Chế độ nhanh
- Che vết bẩn bằng thuốc nhuộm May Grünwald pha loãng trong 1 phút.
- Rửa bằng nước cất đệm.
- Đậy với nước đệm và để yên trong 1 phút.
- Đặt thuốc nhuộm Giemsa pha loãng và để trong 5 phút.
- Rửa bằng nước cất đệm và để khô tự nhiên.
Các kỹ thuật được mô tả ở đây là một hướng dẫn, nhưng phải xem xét rằng các quy trình và thời gian tô màu khác nhau tùy theo nhà thương mại cung cấp thuốc thử. Nên làm theo các bước được chỉ định nghiêm ngặt bởi mỗi nhà thương mại.
Kỹ thuật tạo màu mở rộng tinh trùng
1- Phủ lên một lớp mỏng bằng dung dịch May Grünwald trong 4 phút.
2- Loại bỏ thuốc nhuộm và rửa bằng nước cất.
3- Đặt một lớp Giemsa pha loãng (1:10) vào nước cất trong 15 phút.
4- Loại bỏ thuốc nhuộm và rửa bằng nước cất.
5- Để khô và quan sát dưới kính hiển vi.
Thông số kỹ thuật quan trọng
Kỹ thuật này yêu cầu thuốc thử và dung dịch rửa có độ pH được điều chỉnh thành 7.2-7.3, do đó, ái lực của thuốc nhuộm đối với cấu trúc tế bào không làm biến dạng và không thay đổi màu sắc cuối cùng dự kiến.
Công dụng
Kỹ thuật này được sử dụng bởi các phòng thí nghiệm lâm sàng để nhuộm vết máu ngoại biên và tủy xương, các phần mô và tế bào học.
Trong lĩnh vực huyết học, kỹ thuật này có tầm quan trọng sống còn trong nghiên cứu về sự bất thường của các tế bào về hình dạng, kích thước và số lượng. Nó là một công cụ rất có giá trị để chẩn đoán một số bệnh, như bệnh bạch cầu và thiếu máu.
Ngoài ra, nó còn thể hiện một tiện ích nổi bật khi tìm kiếm ký sinh trùng trong các lĩnh vực huyết học (Plasmodium sp và Trypanosoma cruzi) hoặc mô học (Leishmanias sp).
Tế bào học âm đạo
Đối với tế bào học âm đạo, kỹ thuật này đặc biệt thuận lợi cho việc quan sát Trichomonas âm đạo. Đây là một phát hiện quan trọng, vì sự hiện diện của nó mô phỏng hình ảnh ung thư biểu mô tại chỗ sau đó biến mất khi ký sinh trùng được loại bỏ.
Mẫu tinh trùng
Nó đã là một công cụ lý tưởng để nghiên cứu các mẫu tinh trùng, vì nó cung cấp thông tin có giá trị về chất lượng tinh trùng.
Dữ liệu mà nó cung cấp phải thực hiện chủ yếu với số lượng và hình thái, cũng như với các tế bào đồng thời có thể có và có tầm quan trọng sống còn, như tế bào mầm, bạch cầu và tế bào biểu mô.
Với phân tích này, có thể mô tả những bất thường quan sát thấy trong tinh trùng ở đầu, cổ, mảnh giữa và mảnh chính.
Ngoài ra, họ cũng có thể giúp hiển thị các trường hợp hemospermia (sự hiện diện của các tế bào hồng cầu trong tinh dịch) và leucospermia hoặc pyospermia (tăng số lượng bạch cầu trong tinh dịch).
Tài liệu tham khảo
- Costamagna S, Prado M. Xác nhận thử nghiệm mới, May Grünwald-Giemsa và màu Gram và phương tiện nuôi cấy để chẩn đoán Trichomonas âm đạo. Ký sinh trùng. 2001; 25 (1-2): 60-64. Có sẵn trong: scielo.
- Phòng thí nghiệm Merck KGaA. Có thể Grünwald eosin methylene màu xanh cho kính hiển vi.
- "Vết bẩn May-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. 15 tháng 11 năm 2018, 14:37 UTC. 8 tháng 1 năm 2019, 04:29: vi.wikipedia.org
- Phòng thí nghiệm Hóa chất thủy tinh Panreac. Thuốc thử cho kỹ thuật mô học, huyết học và vi sinh. Có sẵn tại: glasschemicals.com
- Retamales E, Manzo V. Khuyến cáo nhuộm vết máu để đọc công thức máu. Phòng thí nghiệm y sinh quốc gia và tham khảo. Viện sức khỏe cộng đồng Chile.
- Sarabia L. Spermiogram theo tiêu chí của WHO. Chương trình Giải phẫu và Sinh học phát triển. Khoa y Đại học Chile Có sẵn tại: pp.centramerica.com