Chia sẻ:
Nền nhuộm màu, kỹ thuật, ưu điểm và nhược điểm
các nhuộm màu Đây là một phương pháp tạo màu đặc biệt để làm nổi bật sự hiện diện của viên nang trong một số vi sinh vật - chắc chắn Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae và Cryptococcus neoformans-, từ các mẫu lâm sàng hoặc nuôi cấy thuần.
Mẫu trực tiếp thường được sử dụng để nhuộm màu âm tính là dịch não tủy. Kỹ thuật này đại diện cho một sự thay thế nhanh chóng cho chẩn đoán viêm màng não giả định, đặc biệt là Cryptococcus neoformans.
Tương tự như vậy, vết này có thể được áp dụng trên đờm và chất lỏng vô trùng nói chung, cũng như trên các chủng thu được từ nuôi cấy tinh khiết trẻ. Kỹ thuật này sử dụng mực nigrosine hoặc Trung Quốc để thực hiện; do đó, đây là một phương pháp rất đơn giản và kinh tế để áp dụng cung cấp thông tin có giá trị chẩn đoán lớn trong một thời gian ngắn.
Theo nghĩa này, bất kỳ phòng thí nghiệm có thể thực hiện màu này. Tất nhiên, phòng thí nghiệm phải có một đội ngũ nhân viên có năng lực, có khả năng nhận ra các loại men của Cryptococcus neoformans phân lập hoặc nảy chồi và phân biệt chúng với bạch cầu và tạo tác mà mẫu có thể trình bày.
Chỉ số
- 1 nền tảng
- 2 Kỹ thuật
- 2.1 Vật liệu
- 2.2 Thông số kỹ thuật để lấy mẫu
- 2.3 Thực hiện kỹ thuật với các mẫu trực tiếp
- 2.4 Thực hiện kỹ thuật với các chủng từ nuôi cấy
- 2.5 Quan sát trong kính hiển vi
- 3 ưu điểm
- 4 nhược điểm
- 5 nhuộm mô bằng mực Ấn Độ
- 6 tài liệu tham khảo
Nền tảng
Nigrosine và mực Ấn Độ hoạt động theo cách tương tự; do đó, một trong hai chất có thể được sử dụng thay thế cho nhau.
Kỹ thuật này được gọi là nhuộm màu tiêu cực vì nó hoạt động trái với phần còn lại của các kỹ thuật tô màu. Trong đó, những gì còn lại không chắc chắn là cấu trúc đang được tìm kiếm hoặc bạn muốn thấy; đó là vi sinh vật.
Do đó, việc tạo màu dựa trên việc nhuộm đáy vết bẩn trong một màu tối. Trong kịch bản này, các cấu trúc được giới hạn sẽ được tô sáng bằng màu sáng hoặc không màu.
Nói chung, các nấm men được quan sát thấy chất phản xạ, được bao quanh bởi một quầng sáng rõ ràng tương ứng với viên nang. Điều này xảy ra vì mực và nigrosine của Trung Quốc là những chất không thể xâm nhập vào polysacarit tạo thành viên nang của vi sinh vật sống.
Điều đáng chú ý là các cấu trúc khác có thể có trong mẫu trực tiếp, chẳng hạn như bạch cầu hoặc hồng cầu, không xâm nhập.
Bây giờ, nếu các vi sinh vật đã chết, cồn có thể xâm nhập vào bên trong chúng, theo cách mà vết này cũng hữu ích để đánh giá khả năng sống sót của vi sinh vật.
Kỹ thuật
Vật liệu
Nigrosine
Nigrosine nợ tên của nó với màu đen mà nó có. Nó là một chất tổng hợp thu được bằng cách đun nóng hỗn hợp các hợp chất hữu cơ - chẳng hạn như nitrobenzine, anilin và anilin hydrochloride - sử dụng chất xúc tác (sắt hoặc đồng) trong phản ứng nói trên..
Mực Trung Quốc
Mực Trung Quốc là một chất được người châu Á sử dụng chủ yếu để viết, làm các tác phẩm nghệ thuật và vẽ tranh đơn sắc. Nó rất phổ biến trong văn hóa Trung Quốc.
Nó thu được từ mực ống trộn với than nghiền, sản phẩm của việc đốt các cây nhựa nhỏ.
Cũng có thể điều chế nó từ muội than của quá trình đốt cháy hydrocarbon (dầu thực vật), cùng với gelatin protein mang lại sự nhất quán phù hợp để ngăn chặn sự kết tủa của các hạt carbon.
Thông số kỹ thuật để lấy mẫu
- Không yêu cầu nhịn ăn.
- Mẫu CSF, đờm hoặc chất lỏng vô trùng phải chứa ít nhất 1 ml thể tích và phải được chuyển đến nhiệt độ phòng tại phòng thí nghiệm ngay lập tức.
- CSF và mẫu chất lỏng vô trùng nên được thực hiện bởi một bác sĩ chuyên ngành.
- Nó cũng có thể là một nền văn hóa thuần túy của một chủng nghi ngờ liên quan đến các mầm bệnh đã nói ở trên.
Thực hiện kỹ thuật với các mẫu trực tiếp
- Các mẫu phải được ly tâm, sau đó chất nổi trên bề mặt bị loại bỏ và trầm tích được lấy.
- Một giọt vật liệu ly tâm (trầm tích) và một giọt mực hoặc nigrosine của Trung Quốc được đặt trên một phiến đá sạch..
- Nó nên được trộn đều và được phủ bằng một tấm che, cho phép giọt nước trải ra như một lớp màng mỏng mà không vượt quá các cạnh.
- Sau đó, việc chuẩn bị được gắn trong kính hiển vi.
- Nếu chế phẩm quá tối, nó có thể được pha loãng với nước.
Thực hiện kỹ thuật với các chủng từ nuôi cấy
- Một phần rất nhỏ của một cây trồng non được lấy bằng kim gieo hạt và hòa tan trong một giọt mực Trung Quốc trước đó được đặt trên một phiến sạch.
- Một lớp phủ được đặt lên hàng đầu.
- Nó được quan sát trong kính hiển vi ở 10X và sau đó ở 40X.
Bạn cũng có thể hòa tan một phần thuộc địa trong nước cất, và từ đó lấy một giọt và trộn nó với mực. Theo cách này, việc chuẩn bị sẽ không quá dày, khiến cho có thể quan sát các cấu trúc một cách cô lập; Nếu có sự kết tụ, nó sẽ không được quan sát tốt.
Một phương pháp khác như sau:
- Đặt một giọt văn hóa trong huyền phù ở một đầu của slide.
- Đặt một giọt nigrosine vào cùng một đầu và trộn.
- Với sự trợ giúp của một slide khác, mở rộng mẫu như thể bạn đang làm phết tế bào huyết học.
- Để khô và quan sát dưới kính hiển vi.
Quan sát trong kính hiển vi
Trước tiên, bạn phải tập trung với mục tiêu 10X để có cái nhìn bao quát về lĩnh vực này. Sau đó, bạn nên tìm kiếm nếu có không gian rõ ràng; nếu có, hãy tập trung với 40X để xem chi tiết.
Ưu điểm
- Nó rất dễ thực hiện.
- Đây là một kỹ thuật kinh tế.
- Phương pháp này không yêu cầu vết bẩn được cố định với nhiệt hoặc hóa chất; do đó, vi sinh vật được quan sát mà không bị biến dạng.
- Việc chuẩn bị tươi không cần phải sấy khô, vì vậy nó có thể được quan sát ngay lập tức, tạo ra kết quả nhanh chóng.
Nhược điểm
Sau khi lắp ráp, các chế phẩm tươi nên được quan sát ngay lập tức; Nếu chúng được cho phép khô, không còn có thể quan sát chúng và mới.
Nhuộm mô bằng mực Ấn Độ
Một chức năng khác mà mực Trung Quốc có thể đáp ứng là trong các phòng thí nghiệm bệnh lý. Điều này được áp dụng cho các mẫu mô được phẫu thuật cắt bỏ để đánh dấu lề của việc cắt bỏ khối u.
Các mô được đánh dấu được phun axit axetic. Điều này hoạt động như một chất gắn màu và ngăn mực chảy ra khi mô được xử lý thường quy để chuẩn bị sinh thiết.
Thủ tục bao gồm tắm mô trong rượu và xylen, sau đó ngâm trong sáp parafin. Dấu này hướng dẫn nhà nghiên cứu bệnh học khi quan sát mô, cho biết nơi rìa của phẫu thuật cắt bỏ hoặc điểm quan tâm khác là.
Tài liệu tham khảo
- "Nigrosina". Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 11 tháng 7 năm 2017, 22:46 UTC. Ngày 6 tháng 1 năm 2019, 16:56: vi.wikipedia.org
- "Mực Trung Quốc". Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 1 tháng 10 năm 2018, 03:08 UTC. 6 tháng 1 năm 2019, 18h20: vi.wikipedia.org/
- Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J và cộng tác viên. (2006). Nhân viên Lao động của Cộng đồng tự trị Extremadura. Chương trình nghị sự cụ thể Tập IV. Biên tập MAD. Seville-Tây Ban Nha, trang 211-212.
- Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Kỹ thuật viên phòng thí nghiệm chuyên gia, của Dịch vụ y tế Galicia (SERGAS). Chủ đề cụ thể khối lượng 2. Biên tập MAD. Seville-Tây Ban Nha, trang 79-80.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh học của Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Biên tập