Baird Parker Agar nền tảng, chuẩn bị và sử dụng

các Thạch Baird Parker nó là một môi trường nuôi cấy rắn, chọn lọc và khác biệt. Nó được tạo ra vào năm 1962 để phát hiện và đếm Staphylococcus dương tính với coagulase (Staphylococcus aureus).

Nó bao gồm casein thủy phân tụy, chiết xuất thịt, chiết xuất men, lithium clorua, glycine, natri pyruvate, kali Tellurite, agar và nhũ tương lòng đỏ trứng.

Baird Parker agar dựa trên khả năng của S. aureus giảm Tellurite và sản xuất lecithinase. Cả hai thuộc tính tạo ra một thuộc địa với các đặc điểm cụ thể cho loài này. Do đó, nó mang lại hiệu quả cao trong việc phát hiện vi sinh vật này.

Các thuộc địa điển hình của S. aureus Chúng có màu đen hoặc xám đen, với đường viền không màu và quầng sáng rõ ràng bao quanh chúng, phân biệt chúng với phần còn lại của các vi sinh vật. Tác nhân gây bệnh này có thể được tìm thấy trong các mẫu lâm sàng, nước, mỹ phẩm và thực phẩm sống hoặc nấu chín.

Chẩn đoán hoặc phát hiện của nó là rất quan trọng, do sự đa dạng của các bệnh lý mà nó tạo ra, như ngộ độc thực phẩm, hội chứng da bỏng, hội chứng sốc độc, áp xe, viêm màng não, nhiễm trùng máu, viêm nội tâm mạc, trong số những người khác..

Chỉ số

• 1 nền tảng
  • 1.1 Sức mạnh dinh dưỡng
  • 1.2 Chọn lọc
  • 1.3 vi phân
• Chuẩn bị 2
  • 2.1 Nhũ tương lòng đỏ trứng
  • 2.2 Tellurite kali ở mức 1% w / v
  • 2.3 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy
• 3 Sử dụng
  • 3.1 Mẫu lâm sàng
  • 3.2 mẫu thực phẩm
  • 3.3 Mẫu nước
• 4 Kiểm soát chất lượng
• 5 khuyến nghị
• 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Sức mạnh dinh dưỡng

Casein thủy phân tụy, chiết xuất thịt và chiết xuất nấm men là nguồn dinh dưỡng, vitamin và khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của vi sinh vật nói chung, trong khi pyruvate và glycine là những hợp chất có lợi cho sự tăng trưởng cụ thể của Staphylococcus aureus.

Chọn lọc

Baird Parker agar được chọn lọc vì nó chứa các chất ức chế sự phát triển của hệ thực vật đi kèm, đồng thời thúc đẩy sự phát triển của S. aureus. Các hợp chất ức chế là lithium clorua và kali Tellurite.

Chênh lệch

Điều này có nghĩa là cho phép phân biệt S. aureus phần còn lại của Staphylococci coagulase âm tính. S. aureus có khả năng khử Tellurite thành Tellurium kim loại đen, tạo thành khuẩn lạc màu đen hoặc xám đen.

Tương tự như vậy, lòng đỏ trứng cung cấp cơ chất để chứng minh sự hiện diện của enzyme lecithinase và lipase. S. aureus đó là lecithinase dương tính và do đó, một quầng sáng rõ ràng sẽ được quan sát xung quanh thuộc địa, cho thấy lecithin đã bị thủy phân.

Theo nghĩa này, sự xuất hiện trong môi trường thạch của các khuẩn lạc màu đen hoặc xám đen sáng với quầng sáng xung quanh cho thấy sự hiện diện của S. aureus. 

Nếu một vùng kết tủa được hình thành, nó chỉ ra rằng có hoạt động lipase. Một số chủng S. aureus chúng là lipase dương tính và âm tính khác.

Trong trường hợp S. aureus Nếu lipase dương tính, một vùng mờ đục sẽ được quan sát xung quanh thuộc địa màu đen hoặc xám đen, và sau đó là quầng sáng rõ ràng do tác động của lecithinase..

Thuộc địa của vi khuẩn khác S. aureus có thể phát triển trong môi trường này sẽ phát triển các khuẩn lạc không màu hoặc nâu, không có quầng sáng xung quanh.

Các khuẩn lạc đen không điển hình cũng có thể được quan sát có hoặc không có viền không màu, nhưng không có quầng sáng rõ ràng. Những thuộc địa này không nên được tính đến, chúng không tương ứng với S. aureus.

Chuẩn bị

Nhũ tương lòng đỏ trứng

Lấy một quả trứng gà tươi, rửa sạch và đặt 2 đến 3 giờ trong 70% cồn. Sau đó, trứng mở vô trùng và lòng trắng trứng được tách ra cẩn thận với lòng đỏ. Sau đó, 50 ml lòng đỏ được lấy và trộn với 50 ml dung dịch sinh lý vô trùng.

Kali Tellurite ở mức 1% w / v

Một số nhà thương mại bán 1% kali Tellurite sẵn sàng để sử dụng. Nó được thêm vào môi trường trước khi môi trường hóa rắn.

Để chuẩn bị dung dịch này trong phòng thí nghiệm, cân 1,0 g kali Tellurite và hòa tan trong một phần nước. Sau đó, lượng nước được hoàn thành đến 100 ml. Dung dịch phải được khử trùng bằng phương pháp lọc.

Chuẩn bị môi trường nuôi cấy

Cân 60 g môi trường khử nước và hòa tan trong 940 ml nước cất. Để hỗn hợp nghỉ ngơi trong khoảng 5 đến 10 phút.

Áp dụng nhiệt bằng cách khuấy môi trường thường xuyên để cải thiện quá trình hòa tan. Để sôi trong một phút. Tiệt trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Để yên cho đến khi nó đạt đến nhiệt độ 45 ° C và thêm 50 ml nhũ tương lòng đỏ trứng và 10 ml Tellurite 1%. Trộn đều và phục vụ 15 đến 20 ml trên đĩa petri vô trùng.

Cho phép hóa rắn, đặt hàng đảo ngược trong plaquers và lưu trữ trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng.

Độ pH cuối cùng của môi trường chuẩn bị nên ở mức 6,8 ± 0,2.

Trước khi trồng một mẫu, đợi cho đến khi tấm lấy nhiệt độ môi trường. Gieo các tấm bằng cách đánh hoặc gieo trên bề mặt bằng thìa Drigalski.

Màu của môi trường khử nước là màu nâu nhạt và màu của môi trường đã chuẩn bị là màu hổ phách nhạt.

Sử dụng

Mẫu lâm sàng

Các mẫu lâm sàng được gieo hạt trực tiếp bằng cách xả một phần vật liệu vào một đầu của đĩa, và từ đó nó xuất hiện do kiệt sức. Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 35-37 ° C.

Mẫu thực phẩm

Cân 10 g mẫu thực phẩm và đồng hóa trong 90 ml nước pepton 0,1%, pha loãng được chuẩn bị từ đó, nếu cần thiết. Cấy các đĩa trong ba lần với 0,3 ml dung dịch đã chuẩn bị và gieo trên bề mặt bằng thìa Drigalski. Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 35-37 ° C.

Phương pháp này cho phép đếm các khuẩn lạc điển hình thu được và lý tưởng khi có sự hiện diện của S. aureus trên 10 CFU mỗi g / ml mẫu.

Nếu bạn nghi ngờ rằng số lượng S. aureus Nó nhỏ hoặc có rất nhiều hệ thực vật đi kèm, nó được đề xuất để làm phong phú mẫu trong nước dùng đậu nành tripticase với 10% NaCl và 1% natri pyruvate. Điều này sẽ ủng hộ sự tăng trưởng của S. aureus và sẽ ức chế sự phát triển của hệ thực vật đi kèm. Các ống bị vẩn đục sẽ được gieo trên môi trường thạch Baird Parker.

Mẫu nước

Trong hệ thống lọc chân không và khử trùng, 100 ml nước được lọc và sau đó màng vi lọc 0,4 micron được lấy ra bằng kẹp vô trùng và đặt trên tấm Baird Parker. Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 35-37 ° C. Kỹ thuật này cho phép đếm các khuẩn lạc điển hình của S. aureus.

Kiểm soát chất lượng

Để đánh giá chất lượng của môi trường thạch Baird Parker, có thể sử dụng các chủng đã biết, như Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus biểu bì ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 hoặc Proteus mirabilis ATCC 43071.

Trong trường hợp các chủng S. aureus ATCC được biết là làm giảm Tellurite, và chúng là lipase và lecithinase dương tính. Do đó, phải có một sự phát triển thỏa đáng và phát triển các khuẩn lạc lồi với trung tâm màu đen và cạnh không màu, với một quầng sáng mờ và một quầng sáng khác bên ngoài rõ hơn.

Mặt khác, S. biểu bì sự phát triển kém được dự kiến ​​trong môi trường này, với các khuẩn lạc màu nâu xám đến đen, không có quầng rõ ràng.

Để E.coli và P. mirabilis nó được dự kiến ​​sẽ bị ức chế hoàn toàn hoặc một phần. Trong trường hợp phát triển, khuẩn lạc màu nâu sẽ phát triển mà không có vùng mờ đục, cũng không có quầng sáng rõ ràng.

Khuyến nghị

-Môi trường không nên được làm nóng sau khi thêm Tellurite và lòng đỏ.

-Việc chuẩn bị nhũ tương lòng đỏ trứng và bổ sung nó trong môi trường là một bước ô nhiễm rất dễ bị tổn thương. Phải hết sức cẩn thận.

-Nếu có sự hiện diện của các thuộc địa điển hình của S. aureus phải được chứng thực bằng cách gắn thử nghiệm coagulase cho chủng đã nói.

-Nếu có kết quả nghi ngờ với coagulase, các xét nghiệm xác nhận khác phải được gắn.

-Cẩn thận không nhầm lẫn sự hiện diện của các thuộc địa điển hình của S. aureus với các khuẩn lạc không điển hình của màu đen.

Tài liệu tham khảo

1. Wikipedia đóng góp. Môi trường thạch Baird-Parker. Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 15 tháng 3 năm 2017, 19:36 UTC. Có sẵn tại: wikipedia.org/ Truy cập ngày 18 tháng 2 năm 2019.
2. Phòng thí nghiệm BD. Baird Parker Agar. 2006. Có sẵn tại: bd.com
3. Phòng thí nghiệm Britania. Cơ sở thạch Baird Parker. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
4. Phòng thí nghiệm Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Có sẵn tại: http://f-soria.es/Inform
5. Phòng thí nghiệm Britania. Kali Tellurite. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Mang Staphylococcus aureus enterotoxigenic loại A, trong phết tế bào mũi họng trong xử lý thực phẩm. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Covenin tiêu chuẩn Venezuela 1292-89. (1989). Thức ăn Cách ly và đếm Staphylococcus aureus. Có sẵn trong:sencamer.gob.ve