Agar BHI nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch BHI hoặc agar Brain Heart Infar là môi trường nuôi cấy rắn bổ dưỡng. Trong tiếng Tây Ban Nha, chúng tôi gọi nó là agar não truyền dịch. Đây là một môi trường nuôi cấy không chọn lọc, có nghĩa là tất cả các loại vi khuẩn Gram dương và Gram âm có thể được phát triển, cũng như một số nấm men và nấm sợi.

Nó bao gồm dịch truyền não và tim bê, thủy phân peptic của mô động vật, thủy phân tụy casein, natri clorua, glucose, disodium phosphate và agar.

Cần lưu ý rằng thạch BHI là một trong những môi trường nuôi cấy thường xuyên nhất trong các phòng thí nghiệm vi khuẩn học. Nó có thể được sử dụng mà không cần bổ sung như nuôi cấy chính, nuôi cấy các khuẩn lạc thu được trong môi trường chọn lọc khác hoặc để duy trì các chủng trong phòng thí nghiệm.

Mặt khác, nó là một phương tiện lý tưởng được sử dụng làm cơ sở trong việc chuẩn bị môi trường được làm giàu, như thạch máu và thạch sô cô la. Cả hai lý tưởng để phân lập các vi sinh vật đòi hỏi từ quan điểm dinh dưỡng. Tuy nhiên, phải xem xét rằng vì nó có chứa glucose nên việc quan sát các mô hình tán huyết là không đủ.

Tương tự, thạch BHI có thể được sử dụng để điều chế các phương tiện đặc biệt để phân lập các vi sinh vật gây bệnh phát triển khó khăn trong môi trường phổ biến, trong số đó: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae và Histoplasma capsulatum.

Với môi trường thạch BHI phụ gia kháng sinh trở thành môi trường chọn lọc để phân lập nấm.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 Nêm
    • 2.2 Tấm
    • 2.3 Chuẩn bị thạch máu
  • 3 công dụng
    • 3.1 Sử dụng mà không cần bổ sung
    • 3.2 Là môi trường cơ sở cho việc chuẩn bị các phương tiện khác
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Đây là một môi trường nuôi cấy dinh dưỡng để phân lập các vi sinh vật có nhu cầu vừa phải, có thể làm tăng sự phong phú của nó với việc bổ sung máu và các chất bổ sung dinh dưỡng khác.

Nó là một môi trường nuôi cấy không chọn lọc, do đó nó cho phép sự phát triển của hầu hết các vi khuẩn gram dương và gram âm, cũng như một số loại nấm. Tuy nhiên, nó có thể trở nên chọn lọc với việc bổ sung kháng sinh.

Môi trường chứa dịch truyền của não bê và tim, thủy phân peptide từ mô động vật và thủy phân tụy casein; Tất cả các hợp chất này hoạt động như nguồn vitamin, axit amin, nitơ và carbon.

Glucose là một carbohydrate cung cấp năng lượng cho vi sinh vật một khi chúng đã lên men nó. Trong khi đó, natri clorua và disodium phosphate duy trì trạng thái cân bằng thẩm thấu và cung cấp độ pH gần với tính trung lập. Cuối cùng, agar mang lại sự đồng nhất vững chắc cho môi trường.

Chuẩn bị

Cân 52 gram môi trường khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Mang hỗn hợp đến nguồn nhiệt cho đến khi sôi, khuấy thường xuyên trong quá trình hòa tan.

Bạn có thể chuẩn bị nêm hoặc đĩa thạch BHI mà không cần phụ gia.

Nêm

Đối với việc chuẩn bị nêm phục vụ việc chuẩn bị cho đến khi đổ đầy một nửa mỗi ống, đậy nắp và khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút, khi đi ra ngoài để nằm trên đế cho đến khi chúng đông cứng. Sau đó bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng.

Tấm

Hỗn hợp hòa tan được hấp khử trùng ở 121 ° C trong 15 phút, khi nó được để nguội đến 50 ° C và 20 ml môi trường được phục vụ trong các đĩa Petri vô trùng. Chúng được phép hóa rắn, đảo ngược và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi chúng được sử dụng. Để các tấm lấy nhiệt độ phòng trước khi trồng.

Độ pH của môi trường phải là 7,4 ± 0,2.

Môi trường không chuẩn bị là màu be và chuẩn bị là màu hổ phách nhạt.

Chuẩn bị thạch máu

Sau khi khử trùng môi trường, làm nguội đến nhiệt độ khoảng 45 đến 50 ° C, tại thời điểm này, thêm máu (50 ml), trộn nhẹ nhàng để đồng nhất hóa và phục vụ vô trùng 20 ml trong mỗi đĩa Petri. Nếu bong bóng hình thành trên đĩa, ngọn lửa của đầu đốt phải nhanh chóng được truyền qua các bong bóng để loại bỏ chúng.

Tương tự, môi trường đặc biệt có thể được điều chế bằng cách thêm các chất phụ gia tương ứng khi hỗn hợp đạt đến nhiệt độ 45 đến 50 ° C.

Phương tiện có màu đỏ anh đào.

Công dụng

Sử dụng mà không cần bổ sung

Môi trường thạch BHI không có chất phụ gia là hữu ích như là một nền văn hóa chính và để trồng các chủng vi sinh vật tinh khiết có nhu cầu trung bình hoặc vừa phải để xác định sau.

Vì nó là môi trường sáng màu, rất lý tưởng để quan sát các sắc tố và cũng vì nó không chứa các chất gây nhiễu, nên nó có thể được sử dụng để thực hiện các xét nghiệm sinh hóa, như oxyase và catalase, hoặc thực hiện các xét nghiệm sinh hóa khác từ các khuẩn lạc có nguồn gốc từ đây thạch.

Tương tự như vậy, nêm thạch BHI được sử dụng rộng rãi để duy trì các chủng trong một thời gian xác định trong phòng thí nghiệm (acterioteca).

Các tấm hoặc nêm được trồng trên bề mặt với các chủng vi khuẩn được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ. Trong khi, ở nấm, nhiệt độ và thời gian ủ sẽ phụ thuộc vào loại nấm được tìm kiếm.

Là một cơ sở agar cho việc chuẩn bị các phương tiện truyền thông khác

Với cơ sở này có thể được chuẩn bị phương tiện phong phú và chọn lọc.

Phong phú

Chức năng chính của nó là làm cơ sở trong việc chuẩn bị agar máu để sử dụng thường xuyên trong các phòng thí nghiệm vi sinh. Đặc biệt, cơ sở BHI có lợi cho việc phân lập các chủng Streptococcus sp. Tuy nhiên, nó có nhược điểm là không phù hợp để quan sát các mẫu tan máu vì nó có chứa glucose.

Nó cũng được sử dụng để điều chế thạch máu thỏ hoặc ngựa để phân lập Haemophilus sp. Để có kết quả tốt hơn, bạn có thể thêm phần bổ sung làm giàu (IsoVitaleX).

Nếu các mẫu đến từ đường hô hấp đến môi trường thạch, bacitracin có thể được thêm vào để ức chế hệ thực vật đi kèm và tăng khả năng phục hồi của các chủng Haemophilus sp.

Mặt khác, agar máu (thịt cừu hoặc người) có thể được điều chế bằng cystine Tellurite để phân lập Corynebacterium bạch hầu. Tương tự như vậy, rất hữu ích để chuẩn bị thạch máu thỏ, với việc bổ sung cystine và glucose để phân lập Francisella tularensis.

Việc gieo hạt thạch vào máu được thực hiện khi kiệt sức và được ủ ở 35-37 ° C trong 24-48 giờ trong vi khuẩn ưa nước (5-10% CO)2).

Chọn lọc

Môi trường này với việc bổ sung kháng sinh có thể thay thế thạch Sabouraud để phân lập nấm.

Sự kết hợp của thạch BHI với chloramphenicol - gentamicin hoặc penicillin -, streptomycin và máu ngựa là lý tưởng để phân lập Histoplasma capsulatum.

Tùy thuộc vào vi sinh vật được phân lập, nên ủ ở 35-37 ° C hoặc ở nhiệt độ phòng trong thể dục nhịp điệu. Đôi khi ủ là cần thiết trong cả hai phạm vi nhiệt độ, sử dụng 2 tấm cho việc này.

Một số loại nấm như Trichophton tinh trùng chúng nên được ủ ở nhiệt độ phòng trong tối đa 7 ngày.

Kiểm soát chất lượng

Từ mỗi mẻ được chuẩn bị, nên ủ 1 đĩa hoặc nêm ở 37 ° C trong 24 giờ và xác minh rằng không có sự tăng trưởng; Đặc biệt quan trọng khi chuẩn bị thạch máu, vì đây là môi trường dễ bị ô nhiễm.

Mặt khác, chất lượng của môi trường có thể được đánh giá bằng cách tiêm chủng các chủng tiêu chuẩn đã biết hoặc được chứng nhận và quan sát sự phát triển của chúng.

Theo nghĩa này, để đánh giá môi trường thạch BHI không có chất phụ gia, chủng Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 hoặc Candida albicans ATCC 10231. Chúng được ủ ở 37 ° C trong aerobiosis trong 24 đến 48 giờ. Trong mọi trường hợp, tăng trưởng đạt yêu cầu.

Để đánh giá các đĩa thạch máu, chủng  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 hoặc Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Các chủng vi khuẩn được ủ ở 37 ° C trong microaerophilicus trong 24 giờ, trong khi nấm được ủ ở nhiệt độ phòng trong buồng ẩm tối đa 7 ngày. Trong mọi trường hợp, tăng trưởng đạt yêu cầu.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm Britania. Tim não truyền dịch Agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com.
  2. Phòng thí nghiệm BD Agar Truyền tim (BHI) Agar. 2013. Có sẵn tại: bd.com.
  3. Phòng thí nghiệm Difco Francisco Soria Melguizo, S.A. Agar Truyền tim Agar. 2009.
  4. Phòng thí nghiệm Neogen. Agar Truyền tim Agar. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  5. Gil M. Agar máu: nền tảng, sử dụng và chuẩn bị. 2018. Có sẵn tại: lifeder.com.
  6. Wikipedia đóng góp. Truyền tim Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 19 tháng 9 năm 2018, 03:58 UTC. Có sẵn tại: wikipedia.org. Truy cập ngày 2 tháng 3 năm 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.