Cetrimida agar nền tảng, chuẩn bị, sử dụng

các thạch cetrimide hoặc cetrimide là môi trường nuôi cấy rắn chọn lọc, được thiết kế để phân lập Pseudomonas aeruginosa. Nó dựa trên việc làm nổi bật việc sản xuất các sắc tố đặc trưng của loài này và được phát triển từ việc sửa đổi agar Tech, được tạo ra bởi King, Ward và Raney.

Công thức ban đầu chứa muối magiê clorua, kali sunfat, tiêu hóa gelatin tụy và agar-agar. Việc sửa đổi công thức bao gồm bổ sung cetrimide (cetyl trimethyl ammonium bromide) và glycerol.

Cetrimide agar rất hữu ích cho nghiên cứu vi sinh của các mẫu có sự hiện diện của Pseudomonas aeruginosa. Cần lưu ý rằng vi khuẩn này có tầm quan trọng lớn, bởi vì mặc dù nó là một phần của hệ vi sinh vật môi trường bình thường, nó thường hoạt động như một mầm bệnh cơ hội..

Do đó, một trong những vấn đề phổ biến nhất do vi trùng này gây ra là nhiễm trùng bệnh viện, đó là những vấn đề xảy ra trong môi trường bệnh viện, tấn công những bệnh nhân có hệ thống miễn dịch bị suy nhược..

Mặt khác, do ái lực của vi sinh vật này với độ ẩm, các mục tiêu ô nhiễm dễ bị tổn thương nhất là: thiết bị thở hỗ trợ, thuốc, máy phun sương, nguồn nước, điều hòa không khí, khử trùng, dung dịch xà phòng, dung dịch tiêm, vết thương hở , ống thông, ống thông tiểu, trong số những người khác.

Theo nghĩa này, thạch cetrimide rất hữu ích để thực hiện kiểm soát vi sinh và cây trồng theo các yếu tố được đặt tên trước đó.

Chỉ số

• 1 nền tảng
  • 1.1 Giải thích
• Chuẩn bị 2
• 3 công dụng
• 4 hạt giống
• 5 hạn chế
• 6 Kiểm soát chất lượng
• 7 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Cetrimide agar dựa trên khả năng của môi trường để thúc đẩy sự tăng trưởng của P. aeruginosa, kích thích sản xuất các sắc tố của chúng và từ đó ức chế sự phát triển của các vi sinh vật khác.

Các tính chất này là do chức năng mà mỗi thành phần của nó đáp ứng. Các peptone gelatin phục vụ như là một nguồn nitơ, vitamin và khoáng chất. Glycerol hoặc glycerin hoạt động như một nguồn carbon.

Về phần mình, cetrimide (cetyl trimethyl ammonium bromide) là chất ức chế sự phát triển của các vi khuẩn khác hơn P. aeruginosa, bao gồm các loài khác thuộc cùng một chi.

Sự ức chế xảy ra do cetramide hoạt động như một chất tẩy cation, làm mất ổn định màng plasma của hầu hết các vi khuẩn, ngoại trừ P. aeruginosa và một số người khác có thể sống sót.

Mặt khác, nó có chứa magiê clorua và kali sunfat. Các hợp chất này kích thích biểu hiện kiểu hình liên quan đến khả năng của Pseudomonas aeruginosa sản xuất các sắc tố khác nhau, trong số đó: pyocyanin, pioverdin, piorubin, piomelanin và fluorescein. Cuối cùng, nó chứa agar-agar, mang lại cho nó sự nhất quán vững chắc.

Giải thích

Việc giải thích sự tăng trưởng thu được trong môi trường thạch này được thực hiện theo cách sau:

Việc quan sát các khuẩn lạc tròn, nhẵn với các cạnh đều đặn, tạo ra các sắc tố màu xanh lam, xanh lục, nâu hoặc đỏ, cộng với sự phát ra mùi trái cây (aminoacetophenone), là kết quả được cho là có sự hiện diện của vi khuẩn này trong mẫu..

Mặt khác, nó là chỉ dẫn của P. aeruginosa Quan sát sắc tố màu vàng lục sáng trên các khuẩn lạc khi tấm tiếp xúc với tia cực tím.

Cần lưu ý rằng mỗi màu quan sát được là do sản xuất một sắc tố cụ thể. Các sắc tố màu xanh lam tương ứng với việc sản xuất pyocyanin, màu xanh lá cây thành pioverdin, màu đỏ thành piorrubin, màu nâu với piomelanin và huỳnh quang màu xanh lá cây màu vàng sáng dưới ánh sáng cực tím để phát huỳnh quang.

Chuẩn bị

Cân 43 g môi trường khử nước và hòa tan trong nước cất. Thêm 10 ml glycerol. Lấy hỗn hợp đến nguồn nhiệt. Đun sôi trong vài phút cho đến khi hòa tan hoàn toàn.

Nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Để yên và phục vụ trong đĩa petri vô trùng khi nhiệt độ khoảng 50 ° C.

Cho phép hóa rắn, đảo ngược, đặt hàng trong plaquers và lưu trữ trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Để trồng đĩa thạch cetrimide, chúng cần được lấy ra khỏi tủ lạnh trước và cho phép lấy nhiệt độ phòng..

Độ pH cuối cùng của môi trường phải là 7,2 ± 0,2.

Màu của môi trường khử nước là màu be và chế phẩm có màu trắng đục.

Công dụng

Cetrimide agar có thể được sử dụng để trồng tất cả các loại mẫu trong đó có sự hiện diện của Pseudomonas aeruginosa. Do đó, nó rất hữu ích trong tất cả các lĩnh vực vi sinh (môi trường, công nghiệp, lâm sàng, nước và thực phẩm).

Việc phân tích môi trường bệnh viện là rất quan trọng và do đó có thể áp dụng các biện pháp trung gian khắc phục, vì vi sinh vật này tiếp cận bệnh nhân thông qua thiết bị, thuốc men, dung dịch và vật tư bị ô nhiễm được sử dụng bởi bệnh nhân.

Bằng cách này, vi sinh vật có thể gây nhiễm trùng đường hô hấp dưới, đường tiết niệu và vết thương của bệnh nhân bị ức chế miễn dịch.

Số lượng thuộc địa cũng có thể được thực hiện P. aeruginosa trong các thử nghiệm giới hạn vi sinh vật.

Đã gieo

Cetrimide agar có thể được sử dụng như một nền văn hóa chính. Tấm được cấy vào một trong các cạnh của nó và từ đó nó được phân phối do kiệt sức đến phần còn lại của tấm. Các mẫu chất lỏng có thể được gieo trên bề mặt bằng thìa drigalski.

Các đĩa được ủ trong aerobiosis ở 37 ° C trong 24 giờ ủ.

Hạn chế

-Một tỷ lệ nhỏ các chủng  Pseudomonas aeruginosa không sản xuất pyocyanin, vì vậy bạn có thể giải thích một âm tính giả.

-Một số loài Pseudomonas có tầm quan trọng lâm sàng bị ức chế trong môi trường này.

-Mặc dù quan sát các đặc điểm được mô tả cho Pseudomonas aeruginosa, chúng phải được chứng thực bằng các xét nghiệm nhận dạng bổ sung. Một xét nghiệm không nên thiếu là xét nghiệm oxyase, nó phải dương tính.

-Một số vi khuẩn enterobacteria có thể phát triển trong môi trường này và phát triển sắc tố màu vàng, nhưng nó khác với Pseudomonas aeruginosa trong đó khi chiếu tấm vào tia cực tím thì không có huỳnh quang.

-Serratia marcescens quản lý để phát triển và sản xuất một sắc tố màu hồng.

-Nếu các mảng được gieo bằng thạch cetrimide được tiếp xúc trong một thời gian ở nhiệt độ phòng, các chủng P. aeruginosa họ có thể mất huỳnh quang quan sát dưới ánh sáng cực tím, tuy nhiên tài sản được phục hồi nếu được ủ lại ở 37 ° C.

Kiểm soát chất lượng

Để kiểm tra hoạt động đúng của agar cetrimide, các chủng đối chứng có thể được sử dụng, như: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 và Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Kết quả dự kiến ​​là:

• Để P. aeruginosa tăng trưởng tốt, với sắc tố màu xanh lam và fluorescein tích cực.
• S. maltophilia và S. aureus sẽ bị ức chế một phần hoặc hoàn toàn.
• Dự kiến Escherichia coli bị ức chế hoàn toàn.

Tài liệu tham khảo

1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Đặc điểm kiểu hình và huyết thanh học của các phân lập lâm sàng từ Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
2. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Cơ sở thạch cetrimide. 2014. Có sẵn tại: condalab.com
3. Phòng thí nghiệm Britania. Cetrimida agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
4. Phòng thí nghiệm BD Môi trường thạch Pseudosel (thạch Cetrimide). 2013. Có sẵn tại: bd.com
5. Phòng thí nghiệm Francisco Soria Melguizo, C.A. Thạch cetrimide. 2009. Có sẵn tại: http://f-soria.es