Agar sô cô la nền tảng, sử dụng và chuẩn bị



các thạch sô cô la nó là một môi trường nuôi cấy rắn, phong phú, không chọn lọc và không phân biệt. Nó được sử dụng chủ yếu để phân lập các vi sinh vật đòi hỏi từ quan điểm dinh dưỡng, mặc dù nó có thể phát triển bất kỳ loại vi khuẩn.

Đó là lý do tại sao tính hữu dụng của nó tăng lên đặc biệt là trong việc gieo các mẫu thường vô trùng, chẳng hạn như dịch não tủy và dịch khớp. Mặc dù nó cũng được bao gồm trong các phương tiện được chọn để gieo các mẫu đa bào, nhưng trong những trường hợp này, cần phải thêm kháng sinh ức chế hệ thực vật đồng thời.

Phương tiện này có màu nâu đặc trưng rất giống với sô cô la, do đó tên của nó. Việc chuẩn bị rất giống với agar máu, chỉ trong trường hợp này, máu phải được làm nóng để các tế bào hồng cầu bị phá vỡ.

Sự chuẩn bị của nó, giống như thạch máu, rất tinh tế, vì nó dễ bị ô nhiễm. Vì lý do này, nhiều phòng thí nghiệm thích mua phương tiện này đã được chuẩn bị bởi các nhà thương mại đảm bảo chất lượng của họ.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • 2 công dụng
    • 2.1 Thạch sô cô la được chuẩn bị với thạch Columbia
    • 2.2 Thạch sô cô la được điều chế bằng agar cơ sở (đối với gonococci)
    • 2.3 Thạch sô cô la được chuẩn bị với Müeller Hinton agar
    • 2.4 Thạch sô cô la được chuẩn bị với thạch Thayer Martin
  • 3 Chuẩn bị
    • 3.1 Tính toán
    • 3.2 Cân và hòa tan
    • 3.3 Khử trùng
    • 3,4 Tập hợp máu
    • 3.5 Một cách khác để chuẩn bị thạch sô cô la mà không cần sử dụng máu
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Môi trường này bao gồm một cơ sở agar giàu chất dinh dưỡng và máu nóng. Sự tan huyết của các tế bào hồng cầu cung cấp yếu tố X (hemin) và yếu tố V (NAD), cần thiết cho sự phát triển của một số vi sinh vật, chẳng hạn như chi. Haemophilus. Nó cũng rất hữu ích cho việc cô lập Neisserias sp.

Giống như agar máu, các phương tiện khác nhau có thể được sử dụng như một agar cơ sở tùy thuộc vào nhu cầu. Trong số các phương tiện truyền thông được sử dụng là dịch truyền tim và agar đậu nành trypticase, mặc dù khuyến cáo nhiều nhất là agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC và agar Thayer Martin..

Một số biến thể của agar sô cô la bao gồm một chất bổ sung làm giàu có bán trên thị trường được gọi là Isovitalex hoặc Polivitex.

Những chất bổ sung có chứa vitamin B12, L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, p-aminobenzoic acid, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), thiamine pyrophosphate, ferric nitrate, thiamine hydrochloride, cysteine ​​hydrochloride, Lysteine.

Điều quan trọng cần lưu ý là agar sô cô la được làm giàu nhiều hơn so với agar máu, nhưng không cho phép quan sát các mẫu tan máu.

Công dụng

Thạch sô cô la được chuẩn bị với thạch Columbia

Môi trường này chứa casein và tim tụy tiêu hóa, peptide thịt tiêu hóa, natri clorua, agar, chiết xuất men và tinh bột ngô. Nó cũng giàu vitamin, khoáng chất và axit amin thiết yếu.

Cơ sở này với máu nóng là lý tưởng cho việc phân lập vi khuẩn thuộc chi Neisseria. Mặt khác, nếu bổ sung Brucella vào môi trường, vi sinh vật nói trên có thể được phân lập. Kết quả được cải thiện bằng máu ngựa.

Agar sô cô la được chuẩn bị với agar cơ sở (cho gonococci)

Môi trường này có chứa pepton, tinh bột ngô, chất đệm monobasic và dibasic, natri clorua và agar.

Hầu hết các bài thuyết trình sô cô la được chuẩn bị thương mại đều đi kèm với cơ sở này và không chứa máu nóng, nhưng một hỗn hợp tổng hợp của hemin và bổ sung hóa học của các yếu tố tăng trưởng, vitamin, khoáng chất, axit amin, yếu tố V và glucose..

Thạch sô cô la được chuẩn bị với Müeller Hinton agar

Nó được sử dụng để thực hiện xét nghiệm độ nhạy cảm với kháng sinh của các vi sinh vật đòi hỏi, chẳng hạn như Streptococcus pneumoniae sử dụng 5% máu ram nóng.

Nó cũng phục vụ cho sự cô lập chính của Neisserias và Haemophilus, nhưng trong trường hợp cụ thể của sự cô lập Haemophilus Việc sử dụng máu ngựa được ưu tiên, vì nó là nguồn phong phú của yếu tố X và V.

Mặt khác, nếu mẫu được gieo đến từ khu vực không vô trùng, việc bổ sung kháng sinh được khuyến nghị để ức chế hệ thực vật bình thường của khu vực..

Ví dụ cho các mẫu hô hấp nơi nghi ngờ có sự hiện diện của vi khuẩn của chi Haemophilus Bacitracin được sử dụng để ức chế sự tăng trưởng của Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus và Neisseria hoại sinh.

Trong trường hợp mẫu chancre bộ phận sinh dục, nơi nó bị nghi ngờ Haemophilus ducreyi, Một loại thạch sô cô la được chế biến theo cách sau đây đã được sử dụng thành công: agar Müeller-Hinton với 5% máu ngựa sô cô la, làm giàu Isovitalex 1% và vancomycin 3 μg / ml.

Thạch sô cô la được chuẩn bị với thạch Thayer Martin

Phương tiện này là đặc biệt để cô lập Neisseria gonorrhoeae. Nó phải chứa kháng sinh để ức chế hệ thực vật đi kèm. Máu cừu được sử dụng.

Chuẩn bị

Các chỉ dẫn cho việc chuẩn bị agar cơ sở sẽ được sử dụng nên được nhìn thấy. Chúng ở mặt sau của gói môi trường khử nước. Họ thường mô tả bao nhiêu nên cân để chuẩn bị một lít môi trường nuôi cấy.

Trong phòng thí nghiệm bạn có thể chuẩn bị số lượng chính xác cần thiết, nó có thể nhiều hơn hoặc ít hơn một lít.

Tính toán

Một quy tắc ba được thực hiện để tính toán nên cân bao nhiêu để chuẩn bị khối lượng mong muốn. Ví dụ:

Nếu để 1 lít thì cần cân nặng 40 gr và phòng thí nghiệm cần 800 ml, người ta nói:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Công thức sẽ như sau:

X = 32 gr (số lượng cân nặng cho 800 ml).

Cân và hòa tan

Chúng tôi tiến hành cân số lượng cần thiết và đặt nó trong một fiola với nước.

Đun ở nhiệt độ vừa phải và trộn nhẹ nhàng với chuyển động quay cho đến khi môi trường khử nước hoàn toàn hòa tan, để nó sôi trong 1 phút.

Khử trùng

Các fiola được đưa vào nồi hấp để khử trùng môi trường ở 121 ° C trong 20 phút.

Tổng hợp máu

Khi rời nồi hấp, nó được để yên cho đến khi nhiệt độ môi trường xấp xỉ từ 56 đến 70 ° C để đặt máu và trộn cho đến khi môi trường chuyển sang màu nâu.

Nếu bạn sẽ thêm chất bổ sung, đây là thời gian để làm điều đó. Sau đó trộn và phục vụ 20 ml cho mỗi đĩa Petri vô trùng.

Toàn bộ quy trình phải được thực hiện trong tủ hút dòng chảy hoặc xung quanh đầu đốt Bunsen.

Để yên cho đến khi chúng đông cứng và giữ trong tủ lạnh.

Một cách khác để chuẩn bị thạch sô cô la mà không cần sử dụng máu

Môi trường cơ sở được chuẩn bị như mô tả ở trên, hemoglobin khử nước thương mại được hòa tan và khử trùng trong nồi hấp.

Cả hai giải pháp được phép làm mát đến 50 ° C, tham gia và thêm phần bổ sung. Trộn trong điều kiện vô trùng và sau đó phục vụ trong đĩa petri vô trùng.

Kiểm soát chất lượng

Điều quan trọng là máu được đặt ở nhiệt độ được chỉ định, bởi vì đó là lý tưởng để tiết ra các tế bào hồng cầu và đồng thời duy trì yếu tố V là nhiệt..

Không nên có bong bóng trên bề mặt thạch. Mỗi lô 100 đĩa nên được ủ một hoặc hai đĩa trong bếp ở 37 ° C trong 24 giờ để kiểm tra độ vô trùng của nó.

Để có kết quả tốt nhất, nên sử dụng agar sô cô la ngay sau khi chuẩn bị.

Các chủng vi khuẩn đối chứng nên được thực hiện trong phòng thí nghiệm để đánh giá hiệu quả của môi trường mới chuẩn bị cho sự phát triển của các vi sinh vật đòi hỏi chính có tầm quan trọng lâm sàng.

Tài liệu tham khảo

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Thực hành vi sinh lâm sàng. Đại học Cadiz, tái bản lần thứ 2. Dịch vụ xuất bản UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Biên tập.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Tái bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Tính khả thi của việc sử dụng môi trường nuôi cấy cơ sở của Agar GC-Biocen trong Phòng thí nghiệm vi sinh. Rev Cubana Med,  2004; 56 (3): 237-238. Có sẵn tại: scielo.sld.
  5. Wikipedia đóng góp. Thạch sô cô la. Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 17 tháng 12 năm 2018, 19:54 UTC. Có sẵn tại: en.wikipedia.org.