Simmons citrate nền tảng thạch, chuẩn bị và sử dụng



các Simmons Citrate agar Nó là một môi trường rắn được sử dụng như một xét nghiệm sinh hóa để xác định vi sinh vật, đặc biệt là trực khuẩn Gram âm. Phương tiện ban đầu được tạo ra bởi Koser vào năm 1923.

Môi trường Citrate của Koser bao gồm nước dùng có chứa natri photphat, amoni photphat, monopotosphat photphat, magiê sunfat và natri citrat..

Có thể thấy, nguồn carbon duy nhất trong môi trường là citrate và nitơ là ammonium phosphate, protein và carbohydrate bị bỏ qua như một nguồn của các yếu tố này, chúng thường có mặt trong các phương tiện khác..

Do đó, vi khuẩn được tiêm trong môi trường đó chỉ có thể sinh sản nếu nó có thể lấy carbon citrate. Thử nghiệm là dương tính nếu có độ đục trong môi trường, tuy nhiên nó có nhược điểm là độ đục không đặc hiệu có thể xảy ra.

Vấn đề này đã được giải quyết bằng cách Simmons thêm agar và bromothymol blue vào công thức ban đầu của Kosher. Mặc dù nguyên tắc là như nhau, nhưng nó được giải thích khác nhau.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Chế độ gieo hạt
    • 1.2 Giải thích
  • Chuẩn bị 2
  • 3 Sử dụng
  • 4 cân nhắc cuối cùng
    • 4.1 Cấy
    • 4.2 Hạt giống
    • 4.3 Cường độ màu
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Một số vi khuẩn có khả năng sống sót trong trường hợp không lên men hoặc sản xuất axit lactic, cần lấy năng lượng thông qua việc sử dụng các chất nền khác. Trong thử nghiệm này, nguồn carbon duy nhất được cung cấp là citrate.

Vi khuẩn có khả năng tồn tại trong các điều kiện này chuyển hóa citrate nhanh chóng thông qua phương pháp thay thế cho con đường truyền thống, sử dụng chu trình axit tricarboxylic hoặc chu trình lên men citrate.

Quá trình dị hóa citrate của vi khuẩn bao gồm cơ chế enzyme mà không có sự can thiệp của coenzyme A. Enzim này được gọi là citricase (citrate oxaloacetate-lyase) hoặc citrate desmolase. Phản ứng đòi hỏi sự có mặt của một cation hóa trị hai, trong trường hợp này được cung cấp bởi magiê.

Phản ứng tạo ra oxaloacetate và pyruvate, sau đó tạo ra axit hữu cơ ở giữa độ pH kiềm được hình thành bằng cách sử dụng nguồn nitơ. Các axit hữu cơ này được sử dụng làm nguồn carbon tạo ra cacbonat và bicacbonat, tiếp tục kiềm hóa môi trường.

Chế độ gieo

Môi trường Simmons citrate nên được tiêm nhẹ vào đuôi cá bằng cách sử dụng vòng thẳng hoặc kim và ủ trong 24 giờ ở 35-37 ° C. Vào cuối thời gian kết quả được quan sát.

Việc gieo hạt chỉ được thực hiện trên bề mặt thạch. Đừng làm thủng.

Giải thích

Nếu môi trường có màu gốc (màu xanh lá cây) và không có sự tăng trưởng rõ rệt, thử nghiệm là âm tính, nhưng nếu môi trường thay đổi thành màu xanh, nó cho thấy sự hiện diện của các sản phẩm kiềm, được phát hiện bởi chỉ số pH. Trong trường hợp này xét nghiệm dương tính.

Điều này xảy ra bởi vì nếu vi khuẩn sử dụng carbon của citrate, nó cũng có khả năng lấy nitơ của ammonium phosphate mà nó giải phóng amoniac, kiềm hóa môi trường.

Mặt khác, nếu sự phát triển của vi khuẩn được quan sát trong môi trường, nhưng không có sự thay đổi về màu sắc, xét nghiệm cũng nên được coi là dương tính, vì nếu có sự tăng trưởng, điều đó có nghĩa là vi khuẩn có thể sử dụng citrate làm nguồn carbon, mặc dù hiện tại không có thay đổi pH (đôi khi có thể mất).

Nếu có sự nghi ngờ trong việc giải thích màu sắc cuối cùng, nó có thể được so sánh với một ống citrate không được khử trùng.

Chuẩn bị

Cân 24,2 gr môi trường khử nước cho một lít nước. Trộn và để yên trong khoảng 5 phút. Kết thúc hòa tan môi trường bằng cách đun nóng trong 1 hoặc hai phút, khuấy thường xuyên.

Cho 4 ml vào ống nghiệm và nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Khi rời nồi hấp, nghiêng với sự trợ giúp của bộ phận sao cho agar đông cứng lại dưới dạng đỉnh sáo với ít tiếng kêu hoặc đáy và vát nhiều hơn.

Độ pH cuối cùng của môi trường citrate là 6,9 (màu xanh lá cây). Phương tiện này rất nhạy cảm với sự thay đổi pH.

Ở pH 6 hoặc thấp hơn, môi trường chuyển sang màu vàng. Màu này không được quan sát trong xét nghiệm với vi khuẩn.

Và ở pH 7.6 trở lên, môi trường chuyển sang màu xanh Phổ mạnh mẽ.

Sử dụng

Simmons citrate agar được sử dụng để xác định một số vi sinh vật, đặc biệt là trực khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae và các trực khuẩn không lên men glucose khác..

Cân nhắc cuối cùng

Môi trường Simmons citrate là một thử nghiệm rất tế nhị, bởi vì dương tính giả có thể thu được nếu một số lỗi được thực hiện.

Chăm sóc phải được thực hiện như sau:

Cấy

Không tạo ra một chủng vi khuẩn rất dày hoặc được nạp, bởi vì nó có thể làm cho màu vàng đồng phát triển tại nơi trồng, mà không ảnh hưởng đến phần còn lại của môi trường, nhưng nó có thể dẫn đến niềm tin rằng có sự tăng trưởng. Điều tương tự không có nghĩa là tính tích cực của bài kiểm tra.

Tương tự như vậy, một chủng cấy dày có thể tạo ra dương tính giả, bởi vì các hợp chất hữu cơ được tạo hình sẵn trong thành tế bào của vi khuẩn sắp chết có thể giải phóng đủ carbon và nitơ để biến chỉ số pH.

Do đó, lý tưởng là trồng cây bằng kim thay vì tay cầm bằng bạch kim, để tránh lấy vật liệu thừa.

Đã gieo

Mặt khác, khi pin của các xét nghiệm sinh hóa đang được trồng để xác định vi sinh vật đang được đề cập, điều quan trọng là xét nghiệm citrate là đầu tiên được tiêm, để tránh kéo protein hoặc carbohydrate từ môi trường khác.

Trong trường hợp này, có thể thu được dương tính giả, bởi vì bất kỳ chất nào trong số những chất này được đưa vào do nhầm lẫn sẽ bị chuyển hóa và gây ra thay đổi pH.

Một cách khác để tránh sự kéo của các chất là đốt cháy tay cầm tốt và tiêm chủng mới giữa thử nghiệm này và thử nghiệm khác.

Cũng cần cẩn thận khi chạm vào thuộc địa để thực hiện chế phẩm, vì cần tránh một phần agar từ môi trường nuôi cấy mà vi khuẩn đến, do đã giải thích trước đó.

Theo nghĩa này, Matsen, Sherris và Branson khuyên nên pha loãng chất cấy trong dung dịch sinh lý trước khi tiêm thử nghiệm citrate để tránh chuyển các nguồn carbon khác.

Cường độ màu

Phải xem xét rằng cường độ của màu được tạo ra khi thử nghiệm dương tính có thể thay đổi tùy theo nhà thương mại.

Ngoài ra, có những vi sinh vật thử nghiệm dương tính trong 24 giờ, nhưng có những chủng khác cần 48 giờ trở lên để tạo ra sự thay đổi độ pH.

Tài liệu tham khảo

  1. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Tái bản lần 3 Biên tập Panamericana. Thủ đô Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Tái bản lần thứ 5 Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  4. Phòng thí nghiệm BD BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Có sẵn tại: bd.com
  5. Phòng thí nghiệm Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  6. Phòng thí nghiệm chẩn đoán Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016. Có sẵn tại: andinamedica.com.