Agar CLED nền tảng, sử dụng và chuẩn bị



các Thạch thạch (Cystine-Lactose-Electrolytes-Thiếu) là một môi trường nuôi cấy rắn khác biệt, được sử dụng để chẩn đoán nhiễm trùng đường tiết niệu. Thành phần của môi trường nuôi cấy được thiết kế cho sự phát triển tốt của mầm bệnh tiết niệu và lý tưởng cho việc định lượng các đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU).

Môi trường nuôi cấy CLED không chọn lọc, vì các vi sinh vật gram âm và Gram dương có thể phát triển trong đó. Nhưng đây không phải là một vấn đề, vì hầu hết các bệnh nhiễm trùng đường tiết niệu là do một loại vi sinh vật duy nhất.

Trong trường hợp nhiễm trùng đa bào có thể thu được 2 hoặc 3 loại vi khuẩn khác nhau, nhưng nó rất hiếm và hầu hết thời gian là mẫu nhiễm bẩn.

Trong số các vi khuẩn gram âm có thể phát triển trong môi trường này là trực khuẩn thuộc họ. Enterobacteriaceae và trực khuẩn đường ruột khác, uropathogen thường được phân lập nhất trong các mẫu nước tiểu, như sau: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, trong số những người khác.

Tương tự như vậy, trong số các vi khuẩn gram dương có thể phát triển trong môi trường này là Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp và họ thậm chí có thể phát triển men, như phức tạp Candida albicans.

Tuy nhiên, do thành phần hóa học của môi trường, nó không cho phép sự phát triển của một số mầm bệnh sinh dục đòi hỏi, chẳng hạn như Neisseria gonorrhoeae, Rau củ âm đạo, trong số những người khác.

Chỉ số

  • 1 Nền tảng của thạch CLED
  • 2 Nền tảng của môi trường thạch CLED (Bevis)
  • 3 công dụng
    • 3.1 Gieo mẫu nước tiểu
    • 3.2 Giải thích
    • 3.3 Nhận dạng
  • 4 Chuẩn bị
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng của môi trường thạch CLED

Môi trường nuôi cấy CLED có dạng chiết xuất thịt nguồn năng lượng, thủy phân tụy casein và thủy phân gelatin. Chúng cung cấp các chất dinh dưỡng cho sự phát triển của vi khuẩn.

Nó cũng chứa cystine, một loại axit amin cho phép sự phát triển của coliforms, phân biệt bởi kích thước nhỏ của nó.

Tương tự như vậy, đường sữa có chứa carbohydrate lên men, vì lý do này phương tiện này là khác biệt; có thể phân biệt vi khuẩn lên men với đường sữa không lên men.

Các vi khuẩn lên men làm thay đổi độ pH của môi trường bằng cách sản xuất axit, phát triển các khuẩn lạc màu vàng, trong khi các vi khuẩn không lên men không tạo ra sự thay đổi trong môi trường, do đó chúng lấy màu của thạch ban đầu, màu xanh lục.

Phản ứng lên men được tiết lộ nhờ sự hiện diện của chất chỉ thị pH, trong môi trường này có màu xanh bromothymol.

Mặt khác, nồng độ chất điện giải thấp của môi trường ức chế sự phát triển xâm lấn điển hình của chi Proteus, gọi là hiệu ứng tràn lan. Điều này tạo ra lợi thế so với các phương tiện khác, vì nó cho phép đếm UFC, bao gồm cả nếu chi Proteus có mặt.

Tuy nhiên, nồng độ chất điện giải thấp ức chế sự phát triển của một số loài thuộc chi Shigella, đây là một bất lợi đối với các phương tiện khác.

Cơ sở của môi trường thạch CLED (Bevis)

Có một biến thể hoặc sửa đổi của phương tiện này được tạo ra bởi Bevis, người đã kết hợp thành phần axit fuchsin ban đầu (chỉ thị Andrade) vào chế phẩm ban đầu. Nó hoạt động cùng với màu xanh bromothymol để phân biệt quá trình lên men với vi khuẩn không lên men.

Sự khác biệt giữa môi trường thông thường và môi trường sửa đổi là màu sắc được thông qua bởi các thuộc địa. Trong trường hợp vi khuẩn lên men đường sữa, các khuẩn lạc thu được màu đỏ cam với quầng hồng hoặc đỏ, trong khi những vi khuẩn không lên men có màu xám xanh..

Công dụng

Môi trường thạch CLED được sử dụng riêng cho việc gieo mẫu nước tiểu. Việc sử dụng phương tiện này đặc biệt thường xuyên trong các phòng thí nghiệm châu Âu, trong khi ở Mỹ nó ít được sử dụng.

Việc thu thập mẫu phải đáp ứng các thông số nhất định để có được kết quả đáng tin cậy, bao gồm:

  • Không dùng kháng sinh trước khi lấy mẫu.
  • Tốt nhất là lấy nước tiểu từ giờ đầu tiên của buổi sáng, vì nó cô đặc hơn, khi không thể lấy mẫu bằng phương pháp xâm lấn.
  • Rửa kỹ bộ phận sinh dục trước khi lấy mẫu.
  • Hủy dòng nước tiểu đầu tiên và sau đó đặt container.
  • Thu thập từ 25 đến 30 ml nước tiểu trong các thùng chứa có nhãn vô trùng.
  • Mang ngay đến phòng thí nghiệm được bao quanh trong băng.
  • Nó phải được xử lý trước 2 giờ phát thải hoặc làm lạnh ở 4 ° C trong tối đa 24 giờ.

Gieo mẫu nước tiểu

Mẫu nước tiểu phải được pha loãng 1:50.

Để pha loãng, đặt 0,5 ml nước tiểu của bệnh nhân và pha loãng với 24,5 ml dung dịch sinh lý vô trùng.

Đo 0,1 ml nước tiểu pha loãng và gieo trên bề mặt bằng thìa drigalski trên môi trường CLED. Đây là phương pháp gieo hạt được chỉ định để đếm khuẩn lạc. Đó là lý do tại sao nó được sử dụng trong các mẫu nước tiểu, vì kết quả phải được biểu thị bằng CFU / ml.

Để định lượng các khuẩn lạc thu được, hãy tiến hành như sau: đếm số khuẩn lạc của đĩa và nhân với 10 và sau đó bằng 50. Bằng cách này bạn có được lượng CFU / ml nước tiểu.

Giải thích

Đếm trên 100.000 CFU / ml - Nhiễm trùng đường tiết niệu

Đếm dưới 1000 CFU / ml- Không bị nhiễm trùng

Đếm trong khoảng 1000-10.000 CFU / ml - Chắc chắn, có thể nhiễm bẩn, lấy lại mẫu.

Nhận dạng

Các khuẩn lạc được trồng trên môi trường thạch CLED phải được tạo thành Gram và tùy thuộc vào đặc điểm hình thái của vi sinh vật, một tiểu văn hóa nhất định được thực hiện.

Ví dụ, nếu đó là trực khuẩn Gram âm, nó sẽ được gieo trên môi trường thạch MacConkey, nơi quá trình lên men hoặc không của đường sữa được chứng thực. Ngoài ra, một agar dinh dưỡng được đính kèm để thực hiện thử nghiệm oxyase.

Trong trường hợp Gram tiết lộ cocci Gram dương, nó có thể được cấy trong môi trường thạch mannit mặn và trong môi trường thạch dinh dưỡng. Sau đó, thử nghiệm catalase được thực hiện. Cuối cùng, nếu men được quan sát, nó sẽ được gieo trên môi trường thạch Sabouraud.

Nhiều phòng thí nghiệm không cho phép sử dụng môi trường CLED và chỉ thích sử dụng agar máu, MacConkey và agar dinh dưỡng để gieo mẫu nước tiểu.

Chuẩn bị

Trong một lọ chứa một lít nước cất, hòa tan 36,2 gr thạch CLED dạng bột. Sau 5 phút nghỉ ngơi, làm ấm thạch đã bán lại, trộn liên tục cho đến khi sôi trong 1 phút.

Sau đó khử trùng ở 121 ° C trong 15 phút trong nồi hấp. Khi thời gian kết thúc, nó được lấy ra khỏi nồi hấp và để nguội cho đến khi đạt đến nhiệt độ 45 ° C. Sau đó được phục vụ từ 15 - 20 ml trong mỗi đĩa Petri vô trùng.

Quy trình phục vụ các tấm phải được tiến hành bên trong tủ hút dòng chảy hoặc phía trước đầu đốt Bunsen để tránh nhiễm bẩn.

Các tấm được phục vụ được phép hóa rắn, được đặt trong một giá đỡ đĩa đảo ngược và được bảo quản trong tủ lạnh (2-8 ° C) cho đến khi sử dụng.

Độ pH cuối cùng của môi trường chuẩn bị phải là 7,3 ± 0,2.

Tài liệu tham khảo

  1. Khuyến cáo về chẩn đoán vi sinh của nhiễm trùng đường tiết niệu. chil nhiễm trùng.  2001; 18 (1): 57-63. Có sẵn tại: scielo.org.
  2. Panchi J. Xác định các tác nhân vi sinh vật gây nhiễm trùng tiết niệu ở bệnh nhân nội bộ trải qua đặt ống thông bàng quang. 2016. Đại học làm việc để áp dụng cho danh hiệu Bằng cấp trong Phòng thí nghiệm lâm sàng. Đại học kỹ thuật Ambato. Ecuador.
  3. Phòng thí nghiệm Britania. Một nửa CLED. Có sẵn tại: britanialab.com.
  4. Phòng thí nghiệm Renylab Hướng dẫn sử dụng, CLED Agar. 2013 Có tại: www.renylab.ind.br.
  5. Phòng thí nghiệm trồng trọt Hướng dẫn cơ bản về Vi sinh. Có sẵn tại: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Tùy chọn thạch CLED trong thói quen nuôi cấy nước tiểu. Một đánh giá tiềm năng và so sánh. Chẩn đoán truyền nhiễm Microbiol. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Thực hành vi sinh lâm sàng. Đại học Cadiz, tái bản lần thứ 2. Dịch vụ xuất bản UCA.