Agar EMB nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch EMB là môi trường nuôi cấy rắn chọn lọc và khác biệt được sử dụng để phân lập trực khuẩn Gram âm, chủ yếu thuộc họ Enterobacteriaceae và các trực khuẩn Gram âm không đòi hỏi khác. Nó cũng được biết đến bởi từ viết tắt EAM, có nghĩa là màu xanh eosin-methylene.

Môi trường này được tạo ra bởi Holt-Harris và Teague vào năm 1916. Nó chứa peptone, lactose, sucrose, dipotali phosphate, agar, eosin, xanh methylen và nước. Nó rất giống với agar MacConkey, đặc biệt nếu sử dụng agar EMB được sửa đổi bởi Levine, không chứa sucrose.

Trong thực tế, mỗi phòng thí nghiệm quyết định nếu nó hoạt động với cái này hay cái kia, vì chúng thực hiện cùng một chức năng, mặc dù về mặt sinh hóa chúng khác nhau.

Nó thậm chí còn thể hiện nhược điểm tương tự như môi trường MacConkey cổ điển về mặt sản xuất tràn lan của chi Proteus. Do đó, để tránh hiện tượng này, bạn có thể tăng nồng độ agar lên tới 5%.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Chọn lọc
    • 1.2 vi sai
  • Chuẩn bị 2
  • 3 công dụng
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 cân nhắc cuối cùng
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Chọn lọc

Môi trường EMB được chọn lọc một cách tinh tế bởi vì nó có chứa thuốc nhuộm anilin (eosin và xanh methylen), hoạt động như chất ức chế, ngăn chặn sự phát triển của hầu hết các vi khuẩn gram dương và một số trực khuẩn Gram âm đòi hỏi..

Tuy nhiên, môi trường thạch này có một nhược điểm là một số vi khuẩn gram dương có thể chống lại sự hiện diện của các chất ức chế và phát triển thành các khuẩn lạc dạng chấm nhỏ không màu, như Enterococcus faecalis và một số Tụ cầu khuẩn.

Bạn cũng có thể phát triển một số loại men nhất định, chẳng hạn như Candida albicans phức tạp, Nó sẽ cho các khuẩn lạc màu hồng rất nhỏ. Ngay cả chlamydospores cũng có thể được phát triển từ nấm men này nếu mẫu được gieo theo độ sâu.

Chênh lệch

Mặt khác, môi trường thạch EMB cũng là một môi trường khác biệt, vì các thuốc nhuộm này với nhau (eosin và xanh methylen) có đặc tính tạo thành kết tủa ở pH axit, do đó chúng đóng vai trò là chỉ số của quá trình sản xuất..

Do đó, vi khuẩn đường sữa hoặc đường sucrose lên men yếu tạo ra các khuẩn lạc màu tím trong vòng 24 đến 48 giờ. Ví dụ: chi Klebsiella, Enterobacter và Serratia.

Những vi khuẩn lên men mạnh mẽ đường sữa, như Escherichia coli, hoặc sucrose, như Yersinia enteratioitica o Proteus penneri, tạo thành kết tủa màu đen hơi xanh, tạo ra đặc tính tỏa sáng kim loại ở những loài này.

Cần lưu ý rằng nếu sử dụng môi trường levine EMB (không có sucrose), Yersinia enteratioitica và Proteus penneri họ sẽ sản xuất các thuộc địa trong suốt.

Vi khuẩn không lên men đường sữa hoặc sucrose được nuôi dưỡng bởi sự hiện diện của peptones, cung cấp các axit amin và nitơ cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn và tạo ra các khuẩn lạc trong suốt. Ví dụ, chi Salmonella và Shigella, trong số những người khác.

Tương tự như vậy, điều quan trọng cần lưu ý là chi Acinetobacter có thể tạo ra các khuẩn lạc màu xanh hoa oải hương, mặc dù nó không phải là chất lên men của đường sữa, cũng không phải sucrose, nhưng chúng có đặc tính cố định màu xanh metylen trong thành tế bào của nó. Điều này cũng có thể xảy ra với các vi khuẩn oxy hóa khác.

Chuẩn bị

Môi trường mất nước ban đầu là màu be nhạt.

Để chuẩn bị môi trường nuôi cấy này, 36 gram môi trường khử nước phải được cân và treo trong lọ chứa một lít nước cất.

Sau khi để hỗn hợp trong 5 phút khi nghỉ ngơi, hãy mang fiola đến nguồn nhiệt, trộn mạnh và liên tục cho đến khi nó sôi và nó được hòa tan hoàn toàn..

Sau đó, môi trường nuôi cấy hòa tan phải được khử trùng bằng nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Vào cuối thời gian, nó được gỡ bỏ khỏi nồi hấp và để lại một thời gian ngắn. Sau đó, nó được phục vụ thậm chí nóng (45 - 50 ° C) trong khoảng 15 đến 20 ml agar trong mỗi đĩa petri vô trùng. Phương tiện nên là quỳ xanh.

Sau khi phục vụ các đĩa được để lại một chút cho đến khi agar nguội đi một chút. Sau đó, chúng được bảo hiểm và cho phép hóa rắn hoàn toàn. Sau đó, chúng được đặt trong một tấm giữ ngược và được bảo quản trong tủ lạnh (8 ° C) cho đến khi chúng được sử dụng.

Quy trình này tốt nhất là được thực hiện trong tủ hút dòng chảy hoặc ở phía trước đầu đốt Bunsen để tránh nhiễm bẩn.

Điều quan trọng cần lưu ý là mỗi nhà thương mại sẽ chỉ ra số lượng cần cân để chuẩn bị môi trường nuôi cấy.

Độ pH cuối cùng của môi trường phải là 7,2 ± 0,2

Công dụng

Môi trường này được sử dụng để gieo nước tiểu và phân hoặc bất kỳ loại mẫu lâm sàng nào, đặc biệt là nếu nghi ngờ có trực khuẩn Gram âm không đòi hỏi, chẳng hạn như trực khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae, phát triển rất tốt trong môi trường này.

Các vi khuẩn gây bệnh đường ruột của chi Shigella và Salmonella được phân biệt bởi các khuẩn lạc không màu hoặc hơi hổ phách.

Các trực khuẩn lactose không lên men khác cũng phát triển, chẳng hạn như Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, trong số những người khác..

Tương tự như vậy, phương tiện này rất hữu ích trong phân tích vi sinh thực phẩm và nước, vì nó lý tưởng cho giai đoạn xác nhận hoàn toàn xác định coliforms, nghĩa là, chứng thực sự hiện diện của E.coli từ nước dùng EC đục, từ kỹ thuật số có thể xảy ra nhất (NMP).

Kiểm soát chất lượng

Để xác minh rằng môi trường nuôi cấy mới được trồng hoạt động tốt, các chủng đối chứng có thể được trồng để quan sát các đặc tính của các khuẩn lạc và xác minh rằng chúng cho như mong đợi.

Đối với điều này, các chủng ATCC hoặc các chủng được xác định rõ của E.coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa và một số vi khuẩn gram dương, như S. aureus.

Dự kiến E.coli Tạo ra các khuẩn lạc màu xanh đen phát triển tốt với ánh kim loại màu xanh lá cây. Miễn là, Enterobacter aerogenes và Klebsiella sp chúng phải cho các khuẩn lạc nhầy phát triển tốt màu xanh đen.

Về phần mình, Salmonella typhimurium và Shigella flexneri, chúng phải phát triển các khuẩn lạc lớn, không màu hoặc có màu hổ phách nhẹ.

Cuối cùng là thể loại Pseudomonas aeruginosa Nó phát triển như những khuẩn lạc không màu có kích thước không đều, trong khi vi khuẩn gram dương nên bị ức chế hoàn toàn hoặc phát triển một cách tiết kiệm với những khuẩn lạc rất nhỏ.

Cân nhắc cuối cùng

Đôi khi việc khử trùng làm cho màu xanh metylen giảm, quan sát môi trường màu da cam. Để màu xanh metylen bị oxy hóa và màu tím phục hồi, nó phải được trộn nhẹ nhàng cho đến khi màu phục hồi.

Ngoài ra, sau khi khử trùng có thể kết tủa thuốc nhuộm, vì vậy nó phải được trộn đều trước khi phục vụ các món ăn Petri.

Tài liệu tham khảo

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B và Velázquez O. 2009. Kỹ thuật phân tích vi sinh thực phẩm. Tái bản lần 2 Khoa Hóa học, UNAM. Mexico.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Đặc tính và phân bố các chủng của Escherichia coli Khả năng gây bệnh có khả năng gây bệnh của gà thịt từ các trang trại gia cầm ở Peru. Rev điều tra. bác sĩ thú y Peru 2012 23 (2): 209-219. Có sẵn tại: scielo.org.
  3. Phòng thí nghiệm Conda S.A. Eosin Agar và xanh methylen. 2010. Có sẵn tại: condalab.com
  4. Phòng thí nghiệm Britania. Levine E.M.B (Với Eosin và Methylene Blue) 2011. Có sẵn tại: britanialab.com
  5. Phòng thí nghiệm BD BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), đã được điều chỉnh. 2013. Có sẵn tại: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Tái bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh học của Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Biên tập