Agar Endo nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch endo hoặc trung bình Endo là một môi trường nuôi cấy khác biệt, rắn với một mức độ chọn lọc nhất định. Công thức ban đầu được Endo tạo ra vào năm 1904 để phân biệt vi khuẩn lên men đường sữa với vi khuẩn không lên men. Lúc đầu, nó được thiết kế để cách ly Salmonella typhi, nhưng sau đó, mục tiêu của phương tiện đã chuyển sang tìm kiếm coliforms.

Nguyên lý của Endo agar đã được duy trì, nhưng công thức của nó đã trải qua vô số thay đổi trong những năm qua. Hiện nay, môi trường bao gồm các mô động vật tiêu hóa peptide, lactose, dipotali hydro phosphate, natri sulfit, fuchsin cơ bản và agar.

Việc sử dụng chính của môi trường có liên quan đến sự phân lập và phân biệt trực khuẩn Gram âm thuộc họ Enterobacteriaceae và các gia đình khác gần đó..

Trong một thời gian dài, nó đã được sử dụng trong việc phát hiện coliforms trong các mẫu nước, sữa và thực phẩm, nhưng ngày nay việc sử dụng phương tiện này đã bị thay thế bởi các chức năng tương tự khác. Tuy nhiên, một số phòng thí nghiệm vi sinh sử dụng môi trường thạch này để phân lập Enterobacteriaceae từ các mẫu có nguồn gốc lâm sàng.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 Môi trường thạch
    • 2.2 Biến thể của agar m-Endo
  • 3 Sử dụng
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 hạn chế
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Endo agar chứa pepton phục vụ như một nguồn axit amin, nitơ, carbon và năng lượng, cần thiết cho sự phát triển của các vi sinh vật không bị ô nhiễm.

Mặt khác, đặc tính chọn lọc nhẹ của agar được cung cấp bằng cách bổ sung natri sulfit và fuchsin cơ bản; cả hai thành phần đều ức chế một phần hoặc hoàn toàn sự phát triển của hầu hết các vi khuẩn gram dương.

Đặc tính khác biệt được đưa ra bởi sự hiện diện của carbohydrate có thể lên men, trong trường hợp này là đường sữa và fuchsin cơ bản, cũng là một chỉ số của pH.

Vi khuẩn gram âm phát triển trên môi trường thạch này và có khả năng lên men đường sữa sẽ tạo thành các khuẩn lạc màu hồng mạnh; là bệnh lý của Escherichia coli sự hình thành các khuẩn lạc màu đỏ sẫm với ánh kim màu xanh lục óng ánh. Điều này là do sự sản xuất cao axit từ quá trình lên men carbohydrate.

Cần lưu ý rằng môi trường xung quanh các thuộc địa cũng chuyển sang màu hồng mạnh mẽ. Trong khi trực khuẩn gram âm không lên men của đường sữa tạo thành khuẩn lạc màu hồng nhạt tương tự như trung bình hoặc không màu.

Dipot kali hydro photphat cân bằng độ pH của môi trường và agar là thành phần cung cấp sự đồng nhất rắn.

Chuẩn bị

Agar Endo

Cân 41,5 gr môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Làm nóng hỗn hợp bằng cách khuấy thường xuyên cho đến khi hòa tan hoàn toàn môi trường. Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C, ở áp suất 15 lb., trong 15 phút.

Khi lấy ra khỏi nồi hấp, để nguội đến nhiệt độ khoảng 45-50 ° C, lắc hỗn hợp để đồng nhất hóa trước khi dùng. Đổ 20 ml vào đĩa Petri vô trùng.

Để các tấm cứng lại, đảo ngược và lưu trữ trong hộp hoặc bọc bằng giấy tối trước khi lưu trữ trong tủ lạnh. Điều rất quan trọng để bảo vệ môi trường chuẩn bị từ ánh sáng trực tiếp. Một thực hành được khuyến nghị là chuẩn bị số lượng chính xác sẽ cần.

Nếu được bảo quản trong tủ lạnh, các tấm phải được tôi luyện trước khi sử dụng.

Độ pH của môi trường phải nằm trong khoảng từ 7,2 đến 7,6 và màu của môi trường đã chuẩn bị là màu hồng nhạt..

Biến thể agar m-Endo

Có một phiên bản khác của thạch Endo (m-Endo) theo công thức của McCarthy, Delaney và Grasso, chứa nhiều hợp chất hơn và thay đổi trong cách điều chế..

Biến thể này bao gồm: Lactose, triptose, tiêu hóa enzyme casein, tiêu hóa enzyme mô động vật, natri clorua, kali photphat dibasic, natri sulfit, chiết xuất men, kali photphat monobasic, fuchsin cơ bản, natri deoxycholate, lauryl sulfate natri và agar.

Trong trường hợp này, chúng tôi cân 51 g môi trường khử nước và đình chỉ trong 1 lít nước cất có chứa 20 ml ethanol.

Đun nhẹ trong khi khuấy cho đến khi môi trường hòa tan hoàn toàn. Không quá nóng và không khử trùng trong nồi hấp. Khi hỗn hợp đồng nhất, phục vụ trong đĩa petri vô trùng và cho phép hóa rắn.

Sử dụng

Ở một số quốc gia, nó vẫn được sử dụng để đếm tổng coliforms và phân trong mẫu nước và thực phẩm, đặc biệt là sự hiện diện của Escherichia coli là chỉ số chính của ô nhiễm phân.

M-Endo agar được Hiệp hội Y tế Công cộng Hoa Kỳ (APHA) khuyến nghị để theo dõi và kiểm soát các chương trình khử trùng và xử lý nước thải, cũng như trong việc đánh giá chất lượng nước uống.

Phương pháp được sử dụng nhiều nhất là lọc màng, sau khi làm giàu mẫu bằng nước dùng Lauryl sulphate trong 2 đến 4 giờ.

Nó cũng có thể được sử dụng thay thế cho thạch EMB trong phân tích vi sinh thực phẩm và nước bằng kỹ thuật số có thể xảy ra nhất (NMP), đặc biệt là trong giai đoạn xác nhận hoàn chỉnh để chứng thực sự hiện diện của E.coli từ nước dùng EC đục.

Kiểm soát chất lượng

Để đánh giá chất lượng của mẻ thạch Endo đã chuẩn bị, các chủng đối chứng đã biết hoặc đã được chứng nhận được gieo.

Trong số các chủng có thể được sử dụng cho mục đích này là: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Viêm phổi do Klebsiella ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 và Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Các chủng được gieo do kiệt sức và được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong thể dục nhịp điệu.

Kết quả dự kiến ​​là:

  • Để Escherichia coli: khuẩn lạc màu đỏ mạnh mẽ, với ánh kim.
  • Để E. cloa và K. pneumoniae các khuẩn lạc phải là chất nhầy màu hồng.
  • Trong trường hợp của S. typhimurium, S. flexneri và P. mirabilis khuẩn lạc thường có màu hồng nhạt hoặc không màu.
  • Cuối cùng, E. phân nó được dự kiến ​​sẽ bị ức chế một phần, do đó sự tăng trưởng của nó sẽ kém với các khuẩn lạc màu hồng rất nhỏ.

Hạn chế

-Môi trường Endo có sức chọn lọc thấp, do đó, có thể một số vi sinh vật gram dương như Staphylococcus, Enterococcus và thậm chí cả nấm men có thể phát triển.

-Các trực khuẩn khác không thuộc họ Enterobacteriaceae có thể phát triển trong môi trường này, ví dụ như Pseudomonas sp và Aeromonas sp. Đặc điểm của các chủng này là khuẩn lạc không màu không màu.

-Môi trường được chuẩn bị này rất nhạy cảm với ánh sáng, do đó, việc tiếp xúc kéo dài với điều này làm suy giảm hệ thống chỉ thị, làm hỏng môi trường không thể phục hồi.

-Các thành phần của môi trường được coi là gây ung thư, do đó nên tránh tiếp xúc trực tiếp.

-Môi trường khử nước rất hút ẩm và nên được giữ trong vật chứa ban đầu ở nhiệt độ phòng, đậy kín và trong môi trường khô ráo.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm BD Agar Endo. 2013. Có sẵn tại: bd.com
  2. Phòng thí nghiệm Neogen M Endo Agar. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 7 tháng 9 năm 2017, 08:27 UTC. Ngày 28 tháng 2 năm 2019, 22:55. Có sẵn trong: en.wikipedia.
  4. Phòng thí nghiệm MercK. Thạch endo 2019. Có sẵn tại: merckmillipore.com
  5. Phòng thí nghiệm kỹ thuật. M -Endo Agar LES. 2015. Có sẵn tại: liofilool.net