Agar Hektoen nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch Hektoen hoặc thạch Hektoen ruột là một môi trường nuôi cấy rắn, chọn lọc và khác biệt. Nó được tạo ra tại Viện Hektoen bởi King và Metzger để phân lập vi khuẩn gây bệnh đường ruột của chi Shigella và Salmonella..

Môi trường bao gồm peptone proteose, chiết xuất men, muối mật, lactose, sucrose, salicin, natri thiosulfate, natri clorua, citrat sắt, ammonium citrate, xanh bromothymol, axit fuchsin và agar. Công thức này cho phép phân biệt các chi Shigella và Salmonella với phần còn lại của vi khuẩn có khả năng phát triển trong môi trường này.

Mặc dù có các phương tiện khác có chức năng tương tự như thạch Hektoen, nhưng điều này mang lại lợi thế lớn hơn so với các phương tiện khác, đặc biệt là khi bạn muốn phục hồi các loài Shigella.

Các loài của cả hai chi tạo ra các vấn đề nghiêm trọng về đường tiêu hóa ở người do tiêu thụ thực phẩm bị ô nhiễm; do đó việc truyền là phân - uống. Đó là lý do tại sao việc sử dụng thạch Hektoen chủ yếu được chỉ định trong phân tích vi sinh của mẫu phân và thực phẩm..

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
  • 3 Sử dụng
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 hạn chế
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Thạch Hektoen chứa peptones và chiết xuất men như một nguồn dinh dưỡng, cung cấp các yếu tố cần thiết cho sự phát triển của vi sinh vật.

Tuy nhiên, nó cũng có muối mật hoạt động bằng cách ức chế sự phát triển của một số vi khuẩn, đặc biệt là Gram dương và một số Gram âm. Vì lý do này, nó được coi là một phương tiện chọn lọc.

Mặt khác, thạch Hektoen là một môi trường khác biệt. Đặc tính này được trao tặng bởi sự hiện diện của carbohydrate lên men như lactose, sacarora và salicin, cùng với hệ thống chỉ thị pH, được đại diện bởi bromothymol màu xanh và axit fuchsin..

Tất cả các vi khuẩn có khả năng phát triển trong môi trường không thuộc chi Salmonella và Shigella này sẽ phát triển các khuẩn lạc cá hồi hoặc cam ngoại trừ chi Proteus. Điều này là do sự lên men của một hoặc một số carbohydrate có mặt, làm axit hóa môi trường, khiến chỉ số pH biến đổi.

Về phần mình, chi Shigella và Salmonella không thể lên men với bất kỳ loại carbohydrate nào, chỉ sử dụng pepton như một nguồn năng lượng, làm kiềm hóa môi trường và do đó các khuẩn lạc của nó có màu xanh lam.

Ngoài ra trong môi trường này có thể được phân biệt vi khuẩn có khả năng hình thành hydro sunfua (khí không màu). Natri thiosulfate hoạt động như một nguồn lưu huỳnh trong khi sắt citrate là tác nhân tiết lộ. Cả hai hợp chất đều có thể tạo thành kết tủa đen của sắt sunfua, chứng tỏ phản ứng.

Kết tủa màu đen ở trung tâm của thuộc địa với một quầng sáng trong suốt xung quanh mang lại vẻ ngoài cho mắt cá. Đặc điểm này cho thấy sự hiện diện của chi Salmonella.

Cuối cùng, natri clorua duy trì sự cân bằng thẩm thấu và agar mang lại sự đồng nhất rắn cho môi trường.

Chuẩn bị

Cân 76 g môi trường khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Lắc mạnh hỗn hợp và sau đó để yên trong 10 đến 15 phút. Nó có thể được làm nóng và đun sôi, cho chuyển động quay cho đến khi hòa tan hoàn toàn. Phương tiện này không được hấp khử trùng.

Khi môi trường đạt đến nhiệt độ khoảng 45 ° C, thể tích 20 ml được đổ trực tiếp vào đĩa Petri vô trùng..

Các agar được phép hóa rắn. Lúc đó họ đã sẵn sàng để sử dụng. Đó là khuyến khích để sử dụng chúng ngay lập tức. Nếu không thể, chúng nên được giữ trong tủ lạnh cho đến khi chúng được sử dụng.

Các tấm phải được lấy ra khỏi tủ lạnh trước khi trồng để lấy nhiệt độ phòng.

Độ pH của môi trường nên là 7,5 ± 0,2. Màu của môi trường khử nước là màu tím và được chuẩn bị là màu nâu xanh.

Sử dụng

Việc sử dụng thạch Hektoen được khuyến nghị cho việc tìm kiếm vi khuẩn thuộc chi Shigella và Salmonella trong mẫu phân và thực phẩm..

Khả năng phân lập các vi khuẩn này tăng lên rất nhiều nếu mẫu trước đó được làm giàu trong nước dùng đặc biệt, chẳng hạn như nước dùng selenite, nước dùng cystine selenite, nước dùng tetrathionate, v.v..

Cấy phải mạnh và gieo hạt được thực hiện bằng cách đánh. Các tấm được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong aerobiosis.

Thời gian ủ bệnh được khuyến nghị trong 48 giờ vì đặc điểm của các khuẩn lạc rõ ràng hơn cho sự giải thích và phân biệt của chúng tại thời điểm này.

Kiểm soát chất lượng

Để thực hiện kiểm soát chất lượng trên phương tiện này, các chủng vi khuẩn được chứng nhận được sử dụng, như: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 và Shigella sonnei ATCC 25931.

Các kết quả dự kiến ​​là như sau: Salmonella typhimurium và  Salmonella enteritidis họ phải phát triển các khuẩn lạc xanh lục có hoặc không có trung tâm màu đen. Trong khi các loài Shigella sẽ phát triển thành các thuộc địa màu xanh lam.

Bạn cũng có thể bao gồm các chủng Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Viêm phổi do Klebsiella ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 và Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Trong những trường hợp này, các đặc điểm quan sát được như sau: E.coli và K. pneumoniae Trong môi trường này, chúng sẽ phát triển các khuẩn lạc từ cá hồi đến cam, với kết tủa cùng màu xung quanh chúng. Trong khi đó, Proteus sẽ phát triển các thuộc địa màu xanh lam có hoặc không có trung tâm màu đen.

Trong khi S. aureus và  E. phân nên bị ức chế, đôi khi E. phân quản lý để phát triển như các thuộc địa màu vàng, rất nhỏ.

Mặt khác, vì môi trường này không được khử trùng trong nồi hấp, điều quan trọng là phải đánh giá tính vô trùng của môi trường. Do đó, mỗi mẻ được chuẩn bị nên được ủ từ một đến hai đĩa mà không cần tiêm ở 37 ° C trong 24 giờ trong thể dục nhịp điệu.

Rõ ràng người ta dự đoán rằng không có sự tăng trưởng của bất kỳ loại nào trên đĩa.

Hạn chế

-Các loài Proteus có thể phát triển trong môi trường này và đặc điểm của các thuộc địa của chúng có thể bị nhầm lẫn với các loài Salmonella hoặc Shigella. Vì lý do này, bất kỳ thuộc địa đáng ngờ phải được xác nhận bằng các xét nghiệm sinh hóa.

-Cần phải đi kèm với việc sử dụng môi trường này với các loại thạch ít chọn lọc khác, bởi vì nếu vi sinh vật tìm kiếm được tìm thấy ở nồng độ thấp, nó có thể không phát triển trong môi trường này.

-Không quá nóng trong quá trình chuẩn bị, vì nhiệt độ quá cao làm thay đổi thành phần của môi trường.

-Các khuẩn lạc Salmonella lên men bất thường có thể không được chú ý.

Tài liệu tham khảo

  1. Wikipedia đóng góp. Hektoen ruột thạch. Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 13 tháng 3 năm 2019, 23:38 UTC. Có sẵn tại: .wikipedia.org / Truy cập ngày 16 tháng 3 năm 2019.
  2. Phòng thí nghiệm BD BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Có sẵn tại: bd.com
  3. Phòng thí nghiệm Britania. Hektoen ruột Agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  4. Phòng thí nghiệm Difco Francisco Soria Melguizo. Thạch Hektoen. Có sẵn tại: f-soria.es
  5. Hướng dẫn sử dụng Difco & BBL, Agar ruột Hektoen. Phiên bản 2. Có sẵn trong: bd.com/europe