Chuẩn bị, chuẩn bị và sử dụng Agar LIA (Lysine Iron)



các LIA thạch (Lysine Iron) là một xét nghiệm sinh hóa được sử dụng để xác định vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae. Phương tiện này được tạo bởi Edwards và Fife, dựa trên công thức của Falkow.

Ban đầu xét nghiệm này là nước dùng có chứa pepton, chiết xuất men, glucose, L-lysine, bromocresol tím và nước cất. Edwards và Fife đã thêm agar-agar, ferric ammonium citrate và natri thiosulfate.

Xét nghiệm về cơ bản bao gồm chứng minh sự hiện diện của enzyme lysine decarboxylase, có khả năng phản ứng với nhóm carboxyl của axit amin L-lysine. Sự khử amin của axit amin cũng có thể xảy ra do sự hiện diện của enzyme lysine deaminase.

Ngoài ra, thành phần của môi trường cho phép chứng minh khả năng của một số chi vi khuẩn để sản xuất hydro sunfua. Cuối cùng, cũng có thể quan sát sự phát sinh hay không của khí ở giữa.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Peptones và chiết xuất men
    • 1.2 Glucose
    • 1,3 L-lysine
    • Chỉ số pH 1,4 (bromocresol tím)
    • 1.5 Ammonium ferric citrate và natri thiosulfate
  • 2 Diễn giải bài kiểm tra
    • 2.1 Decarboxyl hóa lysine
    • 2.2 Khử lysine
    • 2.3 Sản xuất hydro sunfua (H2S)
  • 3 Bản ghi kết quả
  • 4 Chuẩn bị
  • 5 công dụng
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Peptones và chiết xuất men

Giống như hầu hết các môi trường nuôi cấy, agar sắt lysine chứa các thành phần cung cấp nguồn dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn. Các thành phần này được đại diện bởi peptones và chiết xuất men.

Glucose

Ngoài ra, agar này có chứa glucose carbohydrate lên men. Được biết, tất cả các vi khuẩn thuộc họ đường lên men Enterobacteriaceae.

Bước này rất quan trọng, bởi vì nó sẽ chịu trách nhiệm axit hóa môi trường, một điều kiện thiết yếu để enzyme lysine decarboxylase, nếu có, hoạt động trên cơ chất của nó.

Trong một số chi vi khuẩn, việc sản xuất khí do quá trình lên men glucose có thể được quan sát.

Khí được chứng minh khi có sự dịch chuyển của agar trong ống, để lại một khoảng trống ở đáy ống, hoặc bằng cách phá vỡ môi trường thành hai hoặc nhiều phần.

L-lysine

Khi lysine được khử carboxyl, một diamine (cadaverine) và carbon dioxide được hình thành.

Decarboxylation xảy ra với sự hiện diện của coenzyme pyridoxal phosphate. Phản ứng này là không thể đảo ngược.

Chỉ thị PH (bromocresol tím)

Tất cả những thay đổi của pH xảy ra trong môi trường bởi các phản ứng khác nhau, được phát hiện bằng chỉ thị pH tím bromocresol.

Theo nghĩa này, khi có axit hóa môi trường chuyển sang màu vàng và khi có kiềm hóa, môi trường trở lại màu tím hoặc tím ban đầu.

Khi sự khử amin của lysine xảy ra do sự hiện diện của enzyme lysine deaminase, một màu đỏ xuất hiện trên bề mặt, điển hình trong chi Proteus, Providencia và một số loài Morganella.

Điều này là do thực tế là trong quá trình khử amin axit alpha-keto-carbonic được hình thành, nó phản ứng với ammonium citrate với sự hiện diện của oxy, gây ra màu sắc nói trên.

Ammonium ferric citrate và natri thiosulfate

Mặt khác, vi khuẩn sản xuất hydro sunfua sẽ được chứng minh bằng sự hiện diện của natri thiosulfate (nguồn lưu huỳnh) và ferric ammonium citrate, nhà phát triển của H2S.

Vi khuẩn sở hữu enzyme thiosulfate reductase có khả năng hoạt động bằng cách giảm natri thiosulfate hiện tại, tạo thành sulphite và hydro sulfide (H2S).

Loại thứ hai là một chất khí không màu, nhưng khi nó phản ứng với muối sắt tạo thành sunfua kim loại, là một hợp chất không hòa tan (kết tủa màu đen có thể nhìn thấy).

Tuy nhiên, khả năng hình thành H2S với phương tiện này không đáng tin cậy lắm, vì một số vi khuẩn lysine decarboxylase âm tính có khả năng tạo H2S sẽ không tạo thành kết tủa đen, vì tính axit của môi trường can thiệp. Do đó, nên kiểm tra với các phương tiện khác có chứa sắt.

Giải thích bài kiểm tra

Decarboxyl hóa lysine

Các ống phải được đọc sau khi kết thúc 24 giờ ủ, nếu không có nguy cơ giải thích sai phản ứng, báo cáo âm tính giả.

Cần phải nhớ rằng phản ứng đầu tiên sẽ xảy ra sẽ là sự lên men của glucose, do đó tất cả các ống sau 10 đến 12 giờ sẽ chuyển sang màu vàng.

Nếu vào cuối thời gian ủ (24 giờ), một nền màu vàng với bề mặt màu tím hoặc tím được quan sát, phản ứng là âm tính. Màu tím của bề mặt tương ứng với sự kiềm hóa của môi trường bằng cách sử dụng pepton.

Một phản ứng tích cực là một trong đó đáy và bề mặt của ống hoàn toàn màu tím, nghĩa là, nó trở lại màu ban đầu.

Do đó, người xác định mức độ tích cực của xét nghiệm là cơ sở hoặc đáy của phương tiện. Nếu bạn nghi ngờ về màu sắc, bạn có thể so sánh nó với ống LIA không được tiêm.

Khử lysine

Một ống chứng minh sự khử amin của lysine sẽ có bề mặt màu nâu đỏ và nền màu vàng (axit) hoặc toàn bộ ống màu nâu đỏ..

Phản ứng này được hiểu là âm tính đối với sự khử carboxyl của lysine, nhưng dương tính với sự khử amin của lysine.

Phản ứng này được xác định và giải thích trong góc xiên.

Sản xuất hydro sunfua (H2S)

Một phản ứng tích cực được quan sát bởi sự xuất hiện của kết tủa đen trong tất cả hoặc một phần của môi trường. Nói chung giữa ranh giới góc xiên và cơ sở.

Nếu kết tủa xảy ra trong suốt ống, nó sẽ không hiển thị các phản ứng khác xảy ra trong môi trường.

Ghi nhận kết quả

Khi diễn giải bài kiểm tra, kết quả được ghi lại như sau:

Đầu tiên đọc góc xiên, sau đó là đáy hoặc taco, sau đó là sản xuất của H2S, và cuối cùng là sản xuất khí.

Ví dụ: K / A + (-). Điều này có nghĩa là:

  • K: Viền kiềm (màu tím)
  • A: Nền axit (màu vàng), nghĩa là phản ứng khử carboxyl âm tính và khử amin âm.
  • +: Sản xuất hydro sunfua
  • (-): Không có ga.

Chuẩn bị

Cân 35 gr sắt lysine agar khử nước và hòa tan trong một lít nước cất.

Đun cho đến khi agar tan hoàn toàn, vì vậy đun sôi trong một phút khuấy thường xuyên. Phân phối 4 ml môi trường trong 13/100 ống nghiệm có nắp bông.

Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Di chuyển khỏi nồi hấp và cho phép nghỉ ngơi theo cách nghiêng, theo cách mà có một cơ sở sâu và một góc xiên ngắn.

Bảo quản trong tủ lạnh 2-8 ° C. Để ủ trước khi trồng chủng vi khuẩn.

Màu của môi trường khử nước là màu be và môi trường chuẩn bị màu tím đỏ.

Độ pH cuối cùng của môi trường chuẩn bị là 6,7 ± 0,2.

Môi trường chuyển sang màu vàng với pH bằng hoặc nhỏ hơn 5,2 và màu tím ở pH 6,5 trở lên.

Công dụng

Xét nghiệm này, cùng với các xét nghiệm sinh hóa khác, được sử dụng để xác định trực khuẩn từ họ Enterobacteriaceae..

Môi trường được gieo bằng một vòng thẳng hoặc kim, một hoặc hai cú đấm được thực hiện ở dưới cùng của ống, và sau đó bề mặt của môi trường được ngoằn ngoèo.

Nó được ủ trong 24 giờ ở 35-37 ° C trong thể dục nhịp điệu. Nếu cần thiết, nó sẽ được ủ trong 24 giờ nữa.

Nó chủ yếu hữu ích để phân biệt các loài Citrobacter Lactose âm tính với Salmonellas sp.

Tài liệu tham khảo

  1. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Tái bản lần 3 Biên tập Panamericana. Thủ đô Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Tái bản lần thứ 5 Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  4. Phòng thí nghiệm Britania. Thạch sắt lysine. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  5. Phòng thí nghiệm BD BBL Lysine Sắt Agar Slants. Năm 2007 có sẵn tại: bd.com
  6. Phòng thí nghiệm Valtek Trung bình L.I.A. 2009. Có sẵn tại: andinamedica.com