Papa dextrose nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các papa dextrose agar nó là một môi trường nuôi cấy dinh dưỡng rắn, không chọn lọc. Nó có thể phát triển các loài vi khuẩn và nấm, nhưng việc sử dụng nó được chỉ định đặc biệt là phân lập nấm sợi và nấm men. Nó cũng được biết đến như là một phương tiện PDA bởi biểu thức tiếng Anh Potato Dextrose Agar.

Nó đặc biệt hữu ích cho việc phân lập nấm phytopathogen, nghĩa là những loài có ảnh hưởng đến thực vật. Để trồng các mẫu từ cây bị nhiễm bệnh, các phương tiện khác như agar Sabouraud hoặc malta agar có thể được sử dụng, tuy nhiên, để sử dụng thường xuyên, agar khoai tây dextrose được ưa thích vì sự sinh bào tử lớn hơn..

Nó cũng được sử dụng để đếm các khuẩn lạc nấm trong các mẫu mỹ phẩm, dược phẩm và một số thực phẩm từ sữa. Tương tự như vậy, việc tạo ra các mẫu phế liệu da để tìm kiếm các tế bào da liễu phát triển rất tốt trong môi trường này là điều thuận lợi..

Môi trường dextrose khoai tây là rất đơn giản và dễ dàng để chuẩn bị trong phòng thí nghiệm. Nó chứa, như tên của nó, khoai tây truyền, dextrose và agar-agar. Ngoài ra các chất ức chế có thể được thêm vào để ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn và tăng tính chọn lọc cho các loài nấm.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 - Chuẩn bị tự chế (phi thương mại) của papa dextrose agar
    • 2.2 - Chuẩn bị thương mại của papa dextrose agar
  • 3 công dụng
    • 3.1 Quy trình trồng mẫu thực vật trên môi trường thạch khoai tây
    • 3.2 Quy trình trồng các mẫu vảy da, tóc hoặc móng trên môi trường thạch papa dextrose
    • 3.3 Thủ tục xác định
    • 3,4 Thuộc tính
    • 3.5 Duy trì các chủng nấm
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Papa dextrose agar là môi trường nuôi cấy cung cấp các yếu tố dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của nấm sợi và nấm men.

Sự kết hợp của truyền khoai tây với glucose cung cấp nguồn năng lượng hoàn hảo cho sự phát triển thỏa đáng của nấm. Trong khi agar là một trong đó cung cấp sự nhất quán cho môi trường.

Môi trường đơn độc không ức chế sự phát triển của vi khuẩn, vì vậy nó là môi trường không chọn lọc. Để làm cho nó chọn lọc, bạn cần bổ sung các chất ức chế như axit tartaric hoặc kháng sinh.

Chuẩn bị

-Chuẩn bị tự chế (phi thương mại) của thạch khoai tây dextrose

Đĩa Petri

Nó được chuẩn bị theo cách sau:

Trước hết, khoai tây được rửa rất tốt, loại bỏ bụi bẩn mà chúng có. Chúng được cắt thành lát mỏng với tất cả mọi thứ và vỏ. 200 g khoai tây được cân và đặt để đun sôi trong một lít nước cất trong nửa giờ.

Sau thời gian được lọc hoặc lọc tất cả các chế phẩm thông qua một miếng gạc.

Chất lỏng thu được được hoàn thành với nước cất cho đến khi đạt đến một lít. Để truyền, 20 g agar-agar và 20 g dextrose được thêm vào, trộn đều và hấp khử trùng ở 121 ° C, ở áp suất 15 pound trong 15 phút.

Để nguội đến 50 ° C và phục vụ trong các đĩa Petri vô trùng. Tấm chuẩn bị được lưu trữ trong tủ lạnh.

Nêm

Bạn cũng có thể chuẩn bị nêm papa dextrose agar.

Trong trường hợp này, trước khi khử trùng trong nồi hấp, 12 đến 15 ml môi trường được đặt trong ống, sau đó chúng được hấp khử trùng và để chúng nằm trên các giá đỡ đặc biệt cho đến khi hóa rắn. Lưu trong tủ lạnh.

Môi trường duy trì ở độ pH 5,6 ± 0,2, tuy nhiên, một số phòng thí nghiệm thêm axit tartaric 10% để giảm độ pH xuống 3,1 ± 0,1 để ức chế sự phát triển của vi khuẩn.

Theo nghĩa tương tự, các phòng thí nghiệm khác thích thêm kháng sinh để chọn lọc cho việc trồng nấm và ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn.

-Chuẩn bị thương mại của thạch khoai tây dextrose

Cân 39 g môi trường khử nước có bán trên thị trường và hòa tan trong một lít nước cất. Nghỉ ngơi trong 5 phút.

Hỗn hợp được làm nóng bằng cách khuấy thường xuyên cho đến khi hòa tan hoàn toàn. Sau đó được khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Tấm hoặc nêm có thể được chuẩn bị. Tiến hành như mô tả ở trên.

Độ pH duy trì ở mức 5,6 ± 0,2. Nếu độ pH 3,1 là mong muốn, nên thêm 14 ml axit tartaric vô trùng 20% ​​trước khi cho vào đĩa..

Màu của môi trường không chuẩn bị là màu be và được chuẩn bị là màu hổ phách nhạt với vẻ ngoài hơi đục hoặc màu trắng đục.

Công dụng

Quy trình trồng mẫu cây trong môi trường thạch khoai tây

-Cho lá có đốm

Lá được cắt thành miếng.

Trong một ly 50cc với 50% cồn, đặt các mảnh lá (mảnh màu và khỏe mạnh), để khử trùng bề mặt trong 20 đến 30 giây. Kéo rượu và thêm natri hypoclorit 20% trong 40 đến 50 giây nếu chúng là lá mỏng và tăng thời gian lên 80 giây nếu vỏ cây và khúc gỗ.

Kéo sodium hypochlorite và mang theo một chiếc kẹp vô trùng các miếng đã khử trùng và đặt chúng lên bề mặt của môi trường (tối đa là 10 miếng). Đặt ngày và ủ từ 20 đến 30 ° C.

-Đối với trái cây và củ

Nếu quả có thịt, hãy mở quả bị ảnh hưởng bởi nấm và lấy miếng bằng dao mổ vô trùng, cả phần bị bệnh và phần khỏe mạnh và đặt nó lên bề mặt của thạch.

Nếu quả có múi, chẳng hạn như chanh hoặc cam, bạn nên mở và gieo hạt.

Khi bề mặt của quả bị ảnh hưởng và quan sát thấy bào tử, tốt nhất nên sử dụng phương pháp nghiền trên đĩa; việc này bao gồm chạm vào bào tử bằng thìa dưới dạng "L" được khử trùng và làm lạnh, sau đó thực hiện gieo hạt ngoằn ngoèo 2 đến 3 lần trên môi trường thạch.

-Đối với ngũ cốc

Chúng được khử trùng như mô tả trong lá và sau đó đặt trên môi trường thạch.

-Đối với cành và thân cây

Việc cạo vỏ cây được thực hiện và sau đó các phần của phần khỏe mạnh và bị bệnh được lấy và gieo trực tiếp lên môi trường thạch..

Các tấm gieo được ủ trong aerobiosis ở 20-30 ° C trong 72 giờ.

Quy trình trồng mẫu da, vảy tóc hoặc móng trên môi trường thạch papa dextrose

Mẫu phải được lấy bằng dao mổ số 11, để cắt tóc bị ảnh hưởng, bong da hoặc móng tay để tìm kiếm các tế bào da liễu. Trước khi lấy mẫu, khu vực này cần được khử trùng bằng cồn 70%.

-Mẫu da

Trong các tổn thương có vảy, các cạnh của tổn thương nên được cạo, vì có nhiều khả năng tìm thấy nấm.

Trong các tổn thương xuất tiết, mẫu được lấy bằng tăm khô hoặc ướt. Gieo ngay trên môi trường thạch khoai tây hoặc thạch Sabouraud. Tránh phương tiện đi lại.

Một phương pháp lấy mẫu khác là thông qua kỹ thuật thảm vuông của Mariat và Adan Campos. Trong trường hợp này, khu vực bị ảnh hưởng được cọ xát 5 lần bằng một miếng len vô trùng để canh tác thêm.

Mẫu có thể được đặt trực tiếp trong môi trường nuôi cấy.

-Mẫu tóc

Tùy thuộc vào bệnh lý, phần bị ảnh hưởng có thể bị cắt hoặc xé rễ. Đặt mẫu vào môi trường nuôi cấy.

-Mẫu móng tay

Bạn có thể cạo hoặc cắt một phần cụ thể của móng bị ảnh hưởng. Nó sẽ phụ thuộc vào loại chấn thương.

Cắt mẫu thành các mảnh 1 mm trước khi gieo để tăng khả năng tiếp xúc của nấm với môi trường nuôi cấy.

Thủ tục xác định

Các khuẩn lạc thu được trong đĩa được phân lập trong các ống chứa agar khoai tây để thực hiện nghiên cứu vĩ mô của các khuẩn lạc (ngoại hình, màu sắc, tính nhất quán, mức độ phát triển)..

Nghiên cứu kính hiển vi (quan sát cấu trúc và sự hình thành của chúng), có thể được thực hiện bằng phương pháp vi mô hoặc quan sát trực tiếp dưới kính hiển vi giữa lamina và lamella.

Số lượng thuộc địa

Phương tiện này cũng có thể được sử dụng để xác định tải lượng nấm và nấm men có trong các mẫu thực vật, thực phẩm, mỹ phẩm hoặc thuốc. Với mục đích này, agar papa dextrose bổ sung kháng sinh được sử dụng, chẳng hạn như: (chloramphenicol, chlorotetracycline hoặc cả hai).

Đổ 1 ml mẫu - tốt nhất là pha loãng - vào đĩa petri vô trùng và rỗng, sau đó làm tan một nút thạch khoai tây dextrose và để nguội đến 45 ° C. Đổ lên đĩa petri và xoay cho đến khi đồng nhất. Để nó nghỉ ngơi cho đến khi nó rắn lại.

Ủ trong aerobiosis ở 20-25 ° C (nấm mốc) hoặc ở 30-32 ° C (nấm men) trong 5 đến 7 ngày trở lên, tùy thuộc vào loại nấm được tìm kiếm và loại mẫu. Hai tấm có thể được sử dụng để ủ trong cả hai phạm vi nhiệt độ.

Bảo dưỡng các chủng nấm

Papa dextrose agar có thể được sử dụng để duy trì các chủng nấm khả thi trong vài năm.

Để làm điều này, nấm được trồng trong nêm thạch papa dextrose và một khi nấm được trồng, nó được phủ bằng dầu khoáng. Dầu phải được khử trùng trong nồi hấp trong 45 phút và có độ nhớt xấp xỉ từ 300 đến 330 Saybolt. Dầu nên vượt quá đầu vát từ 1 đến 2 cm.

Kiểm soát chất lượng

Từ mỗi mẻ chuẩn bị, một hoặc hai đĩa nên được lấy và ủ ở 25 ° C trong 48 giờ hoặc ở 20 ° C trong 96 giờ. Kiểm soát vô trùng tốt là một trong đó không có sự phát triển của các khuẩn lạc.

Các chủng đối chứng cũng được biết đến hoặc được chứng nhận như:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophton tinh trùng ATCC 9533. Trong mọi trường hợp, dự kiến ​​sẽ có sự tăng trưởng tốt.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm Britania. Thạch glucosado. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  2. Phòng thí nghiệm Neogen Thạch Dextrose khoai tây. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  3. Phòng thí nghiệm Insumolab Thạch dextrose khoai tây. Có sẵn tại: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. Mycology chung. 1994. Ed Ed. Đại học Trung tâm Venezuela, Phiên bản thư viện. Venezuela, Venezuela.
  6. Aceituno M. Đánh giá chất lượng vi sinh trong phấn mắt, loại bột nhỏ gọn của phòng thí nghiệm sản xuất quốc gia, theo Phương pháp tham khảo dược điển của Pharmacopeia Usp 2005. Luận án đủ điều kiện cho danh hiệu Nhà hóa học dược phẩm. Đại học San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Xử lý mẫu bề mặt. Tạp chí Mycology của Ibcericerican. 2007; Trang. 1-12