Agar Sabouraud nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch Sabouraud, Còn được gọi là thạch Sabouraud dextrose, nó là một môi trường nuôi cấy rắn, đặc biệt được làm giàu để phân lập và phát triển của nấm, như nấm men, nấm mốc và tế bào da liễu..

Do đó, điều này có nghĩa là không thể thiếu trong phòng thí nghiệm vi sinh để nghiên cứu sự hiện diện của nấm gây bệnh hoặc cơ hội, từ các mẫu lâm sàng hoặc không lâm sàng. Tương tự như vậy, nó cũng lý tưởng cho sự phát triển của các vi khuẩn dạng sợi như Streptomyces và Nocardia. Công dụng của nó rất rộng, nó có thể được sử dụng trong cơ học người, động vật, thực vật và công nghiệp.

Phương tiện này được tạo ra vào năm 1896 bởi bác sĩ da liễu nổi tiếng Raimond Sabouraud, người đã trở thành một chuyên gia nổi tiếng thế giới về các rối loạn của da đầu, chủ yếu gây ra bởi các tế bào da liễu..

Sáng tạo của nó quan trọng đến mức nó đã được sử dụng kể từ đó và nó vẫn tiếp tục cho đến ngày hôm nay, mặc dù với một số sửa đổi.

Mặc dù nó đặc biệt đối với nấm, nhưng ở vi khuẩn trung bình này có thể phát triển, do đó, đối với các mẫu có hệ thực vật hỗn hợp đòi hỏi phải có kháng sinh trong chế phẩm của chúng và do đó ức chế sự phát triển của hệ vi khuẩn có thể có.

Việc lựa chọn kháng sinh nên được thực hiện cẩn thận và có tính đến loại nấm mà bạn muốn phục hồi, vì một số loại bị ức chế khi có mặt một số chất.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Sự kết hợp được sử dụng nhiều nhất của thạch Sabouraud dextrose với kháng sinh
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 Dextrose Sabouraud Agar 
    • 2.2 Sabouraud Dextrose Agar (Sửa đổi Emmons)
    • 2.3 Sabouraud dextrose agar (sửa đổi Emmons) bằng chloramphenicol
    • 2.4 Dextrose Sabouraud Emmons agar với cycloheximide
    • 2.5 Dextrose Sabouraud Agar (Emmons) với chloramphenicol và cycloheximide
    • 2.6 Các loại kháng sinh khác có thể được thêm vào
  • 3 cân nhắc đặc biệt
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 công dụng
    • 5.1 Trồng trọt sơ cấp
    • 5.2 Bào tử
    • 5.3 Bảo tồn
    • 5,4 Microcultures
    • 5.5 Trong cơ thể người
    • 5.6 Bệnh nấm động vật
    • 5.7 Bệnh nấm môi trường
    • 5,8 Mycology công nghiệp
    • 5.9 Bệnh nấm thực vật
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Môi trường thạch Sabouraud dextrose là một môi trường mà trong công thức ban đầu của nó là chọn lọc yếu, do pH axit của nó là 5,6 ± 0,2, tuy nhiên vi khuẩn vẫn có thể phát triển, chủ yếu là trong thời gian ủ bệnh kéo dài.

Môi trường chứa casein peptone và mô động vật tiêu hóa tụy, cung cấp nguồn carbon và nitơ cho sự phát triển của vi sinh vật.

Nó cũng chứa một nồng độ glucose cao, hoạt động như một nguồn năng lượng, có lợi cho sự phát triển của nấm hơn vi khuẩn. Tất cả được trộn với agar-agar, một thành phần cung cấp sự nhất quán phù hợp.

Mặt khác, thạch Sabouraud dextrose có thể được chọn lọc nếu thêm kháng sinh.

Với kháng sinh, nó đặc biệt hữu ích trong các mẫu vết thương, vết loét mở hoặc bất kỳ mẫu nào nghi ngờ nhiễm vi khuẩn lớn.

Sự kết hợp được sử dụng nhiều nhất của thạch Sabouraud dextrose với kháng sinh

-Thạch Sabouraud với chloramphenicol: lý tưởng để phục hồi nấm men và nấm sợi.

-Môi trường Sabouraud với gentamicin và chloramphenicol: trong môi trường này phát triển gần như tất cả các loại nấm và nấm men, và ức chế một số lượng lớn vi khuẩn, bao gồm Enterobacteria, Pseudomonas và Staphylococcus.

-Thạch Sabouraud với cycloheximide: nó đặc biệt hữu ích cho các mẫu từ da hoặc đường hô hấp, miễn là nghi ngờ là nấm lưỡng hình.

Cycloheximide nên được sử dụng thận trọng; Mặc dù nó được sử dụng để ức chế sự phát triển của nấm và nấm men không gây bệnh hoặc môi trường có thể có mặt như chất gây ô nhiễm trong mẫu, nhưng nó cũng ức chế sự phát triển của một số loại nấm như Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp và nấm cơ hội khác.

-Thạch Sabouraud với chloramphenicol cộng với cycloheximide: được sử dụng chủ yếu để phân lập các tế bào da liễu lưỡng hình và nấm. Nó có nhược điểm là nó ức chế một số loài nấm cơ hội như Candida không có albicans, Aspergillus, Zyeimycetes hoặc C. neoformans.

-Thạch Sabouraud với chloramphenicol, streptomycin, penicillin G và cycloheximide: lý tưởng cho các mẫu cực kỳ nhiễm vi khuẩn và nấm hoại sinh, nhưng có nhược điểm là nó ức chế sự phát triển của Actinomyces và Nocardias, ngoài các loại nấm cơ hội nêu trên.

Chuẩn bị

Nếu bạn có các thành phần riêng biệt, bạn có thể chuẩn bị nó theo cách sau:

Thạch Dextrose Sabouraud 

Cân:

- 40 gr dextrose

- 10 g peptone

- 15 gr agar-agar

- Đo 1000 ml nước cất

Tất cả các thành phần được trộn, độ pH được điều chỉnh đến 5,6. Hòa tan các chất hòa tan bằng cách đun sôi, phân phối 20 ml môi trường trong các ống có kích thước 25 x 150 mm, không có mặt bích và tốt nhất là có đầu bông.

Kích thước ống khác cũng có thể được sử dụng, tùy thuộc vào tình trạng sẵn có.

Chúng được hấp khử trùng trong 10 phút ở môi trường áp suất (121 ° C). Không vượt quá thời gian hấp. Khi rời nồi hấp, các ống được nghiêng với một giá đỡ cho đến khi chúng đông cứng lại trong một đỉnh sáo..

Một cách khác là hòa tan các thành phần bằng cách đun nóng cho đến khi nó sôi. Trong cùng một nồi hấp trong 10 phút và sau đó phân phối 20 ml trong các món ăn Petri.

Nếu môi trường thạch Sabouraud dextrose có sẵn, trong đó đã chứa tất cả các thành phần, chúng tôi tiến hành cân lượng lượng quy định của nhà thương mại cho một lít nước. Các bước còn lại giống như các bước được mô tả ở trên.

Dextrose agar Sabouraud (sửa đổi Emmons)

Cân:

-  20 gr dextrose

- 10 g peptone

-  17 gr agar-agar

-  Đo 1000 ml nước cất

Tất cả các thành phần được trộn, độ pH được điều chỉnh thành 6,9. Tiến hành theo cách tương tự như trong trường hợp trước.

Có nhà thương mại cung cấp trung bình với tất cả các thành phần. Trong trường hợp này, cân và chuẩn bị như mô tả trong phần chèn.

Thạch Sabouraud dextrose (sửa đổi Emmons) với chloramphenicol

Dung dịch gốc cloramphenicol

- Cân 500 mg gốc cloramphenicol

- Đo 100 ml ethanol 95%

- Trộn

Môi trường thạch Sabouraud dextrose (Emmons) được điều chế như mô tả ở trên và, ngoài ra, đối với mỗi lít môi trường, thêm 10 ml dung dịch gốc cloramphenicol trước khi hấp..

Dextrose agar Sabouraud Emmons với cycloheximide

Dung dịch gốc cycloheximide

- Cân 5 gr cycloheximide

- Đo 100 ml acetone

- Trộn

Môi trường thạch Sabouraud dextrose (Emmons) được điều chế như đã mô tả và bổ sung cho mỗi lít môi trường thêm 10 ml dung dịch gốc cycloheximide trước khi hấp khử trùng.

Thạch Sabouraud dextrose (Emmons) với chloramphenicol và cycloheximide

Môi trường thạch Sabouraud dextrose (Emmons) được chuẩn bị như mô tả ở trên và thêm vào mỗi lít môi trường thêm 10 ml dung dịch gốc chloramphenicol và 10 ml dung dịch gốc cycloheximide trước khi hấp.

Các kháng sinh khác có thể được thêm vào

20.000 đến 60.000 đơn vị penicillin mỗi lít môi trường.

30 mg streptomycin mỗi lít môi trường.

Cả hai nên được kết hợp sau khi hấp khử trùng môi trường, làm mát nhẹ (50-55 ° C).

0,04 g neomycin mỗi lít môi trường.

0,04 g gentamicin mỗi lít môi trường.

Cân nhắc đặc biệt

Để an toàn, nên trồng thạch Sabouraud dextrose trong các ống hình nêm (nghiêng trong đỉnh sáo) hơn là trong các đĩa Petri, để tránh phân tán và hít phải bào tử..

Điều quan trọng là các ống có môi trường thạch Sabouraud phải được phủ bằng bông chứ không phải bằng nắp vặn, vì đã chứng minh rằng các điều kiện bán nguyệt làm ức chế sự hình thành bào tử ở một số chủng, ví dụ Coccidioides immitis. Ngoài ra, hầu hết các loại nấm là hiếu khí.

Nếu sử dụng nắp vặn, không đóng chặt.

Kiểm soát chất lượng

Các phương tiện truyền thông được chuẩn bị phải có kiểm soát chất lượng để xác minh hoạt động đúng của họ. Cuối cùng, một số chủng đối chứng được gieo.

Đối với thạch Sabouraud dextrose với các chủng ATCC chloramphenicol có thể được sử dụng. Candida albicans, mà phải có sự tăng trưởng tuyệt vời. Một tấm khác được tiêm chủng của Escherichia coli, phải bị ức chế hoàn toàn.

Một tấm không được nuôi cấy được ủ trong đó không có vi sinh vật nào phát triển.

Thạch Sabouraud dextrose với chloramphenicol và cycloheximide có thể được sử dụng các chủng  Trichophton tinh trùng, phải phát triển tốt. Một tấm khác được tiêm với một chủng Aspergillus flavus, trong đó phải có ít tăng trưởng hoặc không tăng trưởng. Ngoài ra, một tấm không được nuôi cấy được ủ để chứng minh tính vô trùng của nó.

Đối với thạch Sabouraud dextrose với cycloheximide, chủng Candida albicans, Trichophton rubrum  o Microsporum canis, cần tăng trưởng tốt.

Tương tự như vậy, một chủng Aspergillus flavus, cho thấy tăng trưởng ít hoặc không tăng trưởng. Cuối cùng ủ một tấm không được kiểm soát để kiểm soát vô trùng.

Công dụng

Tu luyện tiểu học

Môi trường thạch Sabouraud dextrose cổ điển chứa 4 gram dextrose và tuyệt vời như một môi trường phân lập chính, vì nó cho thấy hình thái đặc trưng của từng loại nấm.

Nó cũng là tuyệt vời để chứng minh việc sản xuất các sắc tố. Tuy nhiên, nó không phải là phương tiện thích hợp nhất để quan sát bào tử.

Nó cũng không được khuyến khích để phát triển Blastomyces dermatitidis, bị ức chế bởi nồng độ glucose cao.

Mặt khác, những lưu ý nhất định phải được ghi nhớ để tu luyện.

Một số nấm phát triển tốt hơn ở nhiệt độ phòng, chẳng hạn như nấm mốc, một số khác phát triển thành công ở 37 ° C, giống như một số nấm men và những loại khác có thể phát triển ở cả hai nhiệt độ (nấm lưỡng hình).

Vì lý do này, đôi khi cần phải sử dụng một vài đĩa thạch Sabouraud cho cùng một mẫu, vì chúng thường được trồng thành hai bản để ủ một đĩa ở nhiệt độ phòng và một tấm khác ở 37 ° C..

Ví dụ, Sporothrix schenckii Nó được gieo trong hai tấm; một được ủ ở nhiệt độ phòng để thu được pha khuôn và cái còn lại được ủ ở 37 ° C để thu được pha giống như men, nhưng sau đó cần thêm 5% máu vào môi trường.

Trong các trường hợp khác, như trong các mẫu của mycetomas, hai đĩa thạch Sabouraud được gieo, một bằng cloramphenicol và một với cycloheximide. Đầu tiên sẽ cho phép sự phát triển của các tác nhân gây bệnh của mycetoma có nguồn gốc nấm (Eumicetoma) và tác nhân gây bệnh thứ hai của mycetomas có nguồn gốc vi khuẩn, chẳng hạn như xạ khuẩn..

Bào tử

Thạch dextrose Sabouraud được sửa đổi bởi Emmons chứa 2 gram dextrose và không chỉ được sử dụng để phân lập, mà còn để bào tử và bảo tồn nấm.

Trong phương tiện này nếu bạn có thể phục hồi các chủng Blastomyces dermatitidis.

Bảo tồn

Để bảo quản nuôi cấy nấm có thể được lưu trữ trong tủ lạnh (2-8 ° C). Thời gian lưu trữ có thể thay đổi từ 2 đến 8 tuần. Sau thời gian này, họ phải được cấy ghép để lặp lại quá trình.

Một số loại nấm được duy trì tốt nhất ở nhiệt độ phòng, chẳng hạn như Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum và Microsporum audounii.

Việc duy trì chủng có thể được kéo dài để tránh hiện tượng pleomorism nếu dextrose được loại bỏ hoàn toàn khỏi môi trường thạch và nếu lượng agar trong môi trường giảm để tránh khô.

Vi sinh

Để xác định một số loại nấm sợi, cần phải tiến hành nuôi cấy vi mô bằng thạch Sabouraud hoặc các phương tiện đặc biệt khác để quan sát cấu trúc của sinh sản hữu tính và vô tính.

Trong cơ thể người

Nó được sử dụng chủ yếu để chẩn đoán các bệnh nấm, đặc biệt là những bệnh ảnh hưởng đến da và các phần đính kèm của nó (tóc và móng).

Các mẫu có thể là dịch tiết, dịch tiết, da, tóc, móng, đờm, dịch não tủy hoặc nước tiểu. Các mầm bệnh thường được phân lập là dermatophytes, nấm gây nhiễm nấm dưới da và toàn thân.

Động vật học

Động vật thường bị ảnh hưởng bởi nhiễm nấm, vì vậy thạch Sabouraud cũng hữu ích trong động vật như trong cơ thể người..

Ví dụ, dermatophytes thường có thể ảnh hưởng đến động vật. Đó là trường hợp của Microsporum canis var distortum, thường xuyên lây nhiễm cho chó, mèo, ngựa, lợn và khỉ. Tương tự như vậy, Microsporum gypseum lây nhiễm cho chó, mèo và gia súc.

Các loài chim như gà, gà trống và gà bị ảnh hưởng bởi Microsporum gallinae.

Nấm khác, như Zymonema farciminosum, Chúng cũng là một nguyên nhân gây bệnh ở động vật, chủ yếu ở ngựa, la và lừa, tạo ra một chứng viêm quan trọng trong các mạch bạch huyết.

Sporothrix schenkii và Histoplasma capsulatum ảnh hưởng đến vật nuôi và con người.

Bệnh nấm môi trường

Nhiều loại nấm gây bệnh hoặc cơ hội có thể được tập trung tại bất kỳ thời điểm nào trong một môi trường nhất định, đặc biệt là trong phòng mổ và Đơn vị Chăm sóc Chuyên sâu (ICU) của các phòng khám và bệnh viện. Do đó, cần phải kiểm soát chúng.

Các không gian dễ bị tổn thương khác là các thư viện và các tòa nhà cũ, có thể bị ảnh hưởng bởi nồng độ của nấm môi trường.

Trong nghiên cứu môi trường, thạch Sabouraud dextrose được sử dụng để phân lập nấm.

Bệnh nấm công nghiệp

Không thể thiếu thạch Sabouraud dextrose để nghiên cứu các chất gây ô nhiễm nấm trong sản xuất mỹ phẩm, thực phẩm, đồ uống, da, dệt may, trong số những người khác.

Bệnh nấm

Cây cũng bị bệnh do nấm, ảnh hưởng đến các bộ phận khác nhau của cây, thậm chí có thể kết thúc vụ thu hoạch, gây thiệt hại lớn trong nông nghiệp.

Tài liệu tham khảo

  1. Cuen M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Chẩn đoán vi sinh của mycoses và nghiên cứu độ nhạy cảm với thuốc chống nấm. Khuyến nghị của Hiệp hội các bệnh truyền nhiễm và Vi sinh lâm sàng Tây Ban Nha. Có sẵn tại: coesant-seimc.org
  2. Phòng thí nghiệm ValteK. (2009). Thạch Sabouraud dextrose với cycloheximide. Có sẵn tại: andinamedica.com.
  3. Navarro O. (2013). Bệnh nấm thú y. Đại học nông nghiệp quốc gia. Nicaragua.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh học của Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Biên tập
  5. Casas-Rincon G. Mycology chung. 1994. Ed Ed. Đại học Trung tâm Venezuela, Phiên bản thư viện. Venezuela, Venezuela.