Agar muối và nền tảng manit, chuẩn bị và sử dụng



các agar muối và mannitol hoặc mannitol mặn là một môi trường nuôi cấy rắn, chọn lọc và khác biệt. Nó được tạo ra bởi Chapman để phân lập cầu khuẩn Gram dương gây bệnh, đặc biệt là Staphylococcus aureus.

Tuy nhiên, nó cũng hữu ích để cô lập Staphylococcus biểu bì, đôi khi có thể có mặt như một mầm bệnh cơ hội, và Staphylococcus saprophyticus, mầm bệnh tiết niệu, trong số các loài khác.

Một số Enterococcus có thể phát triển trong môi trường này, cũng như trực khuẩn bào tử Gram dương nhất định.

Phương tiện này rất hữu ích trong việc phân tích các mẫu lâm sàng, nhưng nó cũng được sử dụng trong nghiên cứu vi sinh thực phẩm và kiểm soát chất lượng của các sản phẩm công nghiệp, như mỹ phẩm, thuốc, trong số những thứ khác..

Agar muối mặn bao gồm các chất chiết xuất và pepton của thịt bò, triptein, mannitol, natri clorua, phenol đỏ và agar.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
  • 3 công dụng
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 cân nhắc cuối cùng
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Mannitol agar được chọn lọc nhờ nồng độ muối cao. Độ mặn hoạt động như một chất ức chế và ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn gram âm.

Nó cũng khác biệt do sự hiện diện của carbohydrate mannitol và chỉ số pH đỏ phenol. Từ đó, vi khuẩn có khả năng lên men mannitol tạo ra axit, axit hóa môi trường, biến khuẩn lạc và môi trường màu vàng.

Mặt khác, các khuẩn lạc không lên men mannitol phát triển trong môi trường lấy các chất dinh dưỡng được cung cấp bởi các chất chiết xuất và peptonas của thịt và tripteína. Từ đó vi khuẩn chiết xuất carbon, nitơ, vitamin và khoáng chất cần thiết cho sự tăng trưởng của chúng.

Các khuẩn lạc trong trường hợp này có thể có màu hồng yếu hoặc mạnh, và môi trường vẫn giữ nguyên màu hoặc thay đổi thành fuchsia.

Agar là chất cung cấp sự đồng nhất cho môi trường.

Chuẩn bị

Để chuẩn bị một lít thạch mannit muối, 111 g môi trường khử nước của nhà thương mại được cân và hòa tan trong 1000 ml nước cất, sử dụng một fiola.

Nhiệt được áp dụng bằng cách thường xuyên loại bỏ môi trường để cải thiện quá trình hòa tan. Để nó sôi trong một phút.

Đặt fiola trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Vào cuối thời gian, fiola được lấy ra khỏi nồi hấp, được phép đứng và phục vụ từ 15 đến 20 ml trên đĩa petri vô trùng khi nhiệt độ khoảng 50 đến 55 ° C.

Nó được phép hóa rắn, đặt hàng ở dạng đảo ngược trong plaqueros và giữ trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Trước khi trồng mẫu, bạn phải đợi tấm lấy nhiệt độ của môi trường.

Các tấm được gieo bằng cách đánh hoặc bằng cách gieo trên bề mặt bằng thìa drigalski. Độ pH cuối cùng của môi trường chuẩn bị phải là 7,4 ± 0,2

Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt và màu của môi trường đã chuẩn bị là màu đỏ cam.

Công dụng

Do tính chọn lọc cao, phương tiện này rất lý tưởng để trồng các mẫu có hệ thực vật hỗn hợp, trong đó người ta muốn tìm kiếm sự hiện diện của Staphylococcus aureus, là mầm bệnh chính của chi này.

Theo nghĩa này, một trong những ứng dụng thường xuyên nhất của nó là trong phân tích vi sinh học các mẫu dịch tiết họng và nước mũi, đặc biệt là phát hiện người mang mầm bệnh không triệu chứng S. aureus.

Một số quốc gia đã thực hiện phân tích này như một yêu cầu bắt buộc đối với những người muốn làm việc như một nhà cung cấp thực phẩm.

Kiểm soát này ngăn chặn việc thuê những người là người mang S. aureus, do đó tránh ngộ độc thực phẩm lớn, do tiêu thụ thực phẩm bị nhiễm độc tố tụ cầu.

Nó cũng có thể được bao gồm trong hạt giống của nhiễm trùng vết thương, cấy máu, CSF, rửa phế quản phế quản, trong số những người khác..

Môi trường thạch mannit mặn rất hữu ích trong việc phân lập lại các khuẩn lạc nuôi cấy nước tiểu từ môi trường thạch CLED hoặc môi trường thạch máu có Gram đã tiết lộ cầu khuẩn Gram dương trong các cụm.

Nó cũng có giá trị trong phân tích vi sinh thực phẩm, nước uống, đất, trong số các ứng dụng khác.

Kiểm soát chất lượng

Sau khi một mẻ đĩa với agar mannit muối được chuẩn bị, nên thực hiện kiểm soát chất lượng. Các chủng đối chứng được gieo để hiển thị nếu có tăng trưởng hay không.

Như một sự kiểm soát tích cực, các chủng đã biết Staphylococcus aureus. Nó phải phát triển thỏa đáng bằng cách phát triển các khuẩn lạc màu vàng và môi trường cũng trở thành màu tương tự.

Tương tự như vậy, thật thuận tiện để bao gồm một chủng đã biết Staphylococcus biểu bì. Nó phải phát triển thỏa đáng bằng cách phát triển các khuẩn lạc màu hồng và môi trường giữ nguyên màu hoặc làm tối màu hồng mạnh hơn.

Như một sự kiểm soát tiêu cực, các chủng được sử dụng không nên phát triển trong môi trường này. Ví dụ, bạn có thể trồng một chủng đã biết Escherichia coli hoặc Klebsiella pneumoniae. Kết quả dự kiến ​​là ức chế hoàn toàn, nghĩa là không tăng trưởng.

Ngoài ra, một tấm mà không tiêm chủng nên được ủ. Trong đó không nên có sự tăng trưởng, không thay đổi màu sắc.

Điều quan trọng là tấm không được sử dụng nếu có dấu hiệu hư hỏng, chẳng hạn như nhiễm bẩn, mất nước, đổi màu, trong số những người khác..

Cân nhắc cuối cùng

Khi sử dụng môi trường thạch mannit muối, một số khía cạnh quan trọng phải được xem xét:

-Có được sự tăng trưởng của các khuẩn lạc màu vàng không cho thấy rằng đó là Staphylococcus aureus. Cần phải nhớ rằng một số chủng Enterococcus có thể phát triển trong môi trường và men lên men này, cũng như trực khuẩn bào tử Gram dương nhất định..

Do đó, điều quan trọng là phải thực hiện Gram cho thuộc địa và xét nghiệm catalase.

-Mặt khác, phải xem xét rằng các loài Staphylococcus khác với aureus Chúng cũng có khả năng lên men mannitol. Do đó, điều quan trọng là nuôi cấy thuộc địa vào môi trường dinh dưỡng để lấy từ đó và thực hiện xét nghiệm coagulase.

Trong số các loài Staphylococcus có tầm quan trọng lâm sàng đối với mannit lên men người đàn ông là: S. aureus, S. simulans, S. cap viêm ssp cap viêm, S. cap viêm ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, trong số những người khác.

Những người khác có thể đưa ra một phản ứng khác nhau, đó là, đôi khi tích cực và đôi khi tiêu cực. Một số là S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. trung gian, trong số những người khác.

-Không nên lấy khuẩn lạc trực tiếp từ môi trường thạch mannitol để thực hiện xét nghiệm coagulase, vì nồng độ muối cao của môi trường có thể can thiệp vào kết quả.

-Cuối cùng, nên ủ các đĩa được gieo hạt mannit muối trong tối đa 48 giờ, do thực tế là một số chủng S. aureus Họ có thể lên men từ từ mannitol, mặc dù điều này không thường xuyên lắm.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm Britania. Mannit mặn mặn. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  2. "Muối Mannit mặn". Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 31 tháng 10 năm 2018, 19:08 UTC. Ngày 17 tháng 1 năm 2019, 20:55, có tại: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Tái bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Biên tập
  5. Phòng thí nghiệm BD BD Mannitol Muối Agar. 2013. Có sẵn tại: bd.com.