Đậu nành agar tripticaseína, chuẩn bị và sử dụng



các thạch đậu nành trypticasein hoặc agar đậu nành trypticase là một môi trường nuôi cấy rắn, không chọn lọc và bổ dưỡng. Nó được chỉ định với các chữ cái TSA cho từ viết tắt bằng tiếng Anh Trypticase Soy Agar. Nó bao gồm triptein, peptone đậu nành, natri clorua và agar-agar.

Do sức mạnh dinh dưỡng cao của nó, nó là lý tưởng cho việc trồng các vi sinh vật đòi hỏi vừa phải và không đòi hỏi. Môi trường không có chất bổ sung bổ sung không được khuyến nghị cho nuôi cấy sơ cấp, nhưng nó rất hữu ích để nuôi cấy các chủng thuần chủng và giữ cho chúng tồn tại, trong số các ứng dụng khác.

Ngoài ra, agar này là cơ sở cho việc chuẩn bị môi trường được làm giàu như agar máu, đặc biệt là khi cần phải quan sát các mô hình tán huyết và gắn kết các loại thuốc optoquine và bacitracin, cần thiết trong chẩn đoán Streptococcus pneumoniae và Streptococcus pyogenes tương ứng.

Mặt khác, khi kết hợp với kháng sinh, rất hữu ích để phân lập các vi sinh vật kỵ khí nghiêm ngặt và nghiêm trọng có tầm quan trọng lâm sàng từ các mẫu với hệ thực vật hỗn hợp..

Cuối cùng, thành phần của agar đậu nành tripticasein và hiệu suất của nó đáp ứng các yêu cầu được thiết lập bởi các dược điển khác nhau (Châu Âu, Nhật Bản và Bắc Mỹ).

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 Tấm thạch đậu nành Tripticasein
    • 2.2 Tấm thạch đậu nành Tripticasein bổ sung máu
    • 2.3 Tấm thạch đậu nành Tripticasein bổ sung máu nóng
    • 2.4 Nêm thạch đậu nành tripticaseine
  • 3 công dụng
  • 4 hạt giống
  • 5 Kiểm soát chất lượng
    • 5.1 Kiểm soát vô trùng
    • 5.2 Kiểm soát tăng trưởng
    • 5.3 Kiểm soát sự tăng trưởng và mô hình tán huyết của agar đậu nành tripticasein bổ sung máu
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Đối với sự phát triển thích hợp của vi khuẩn là cần thiết sự hiện diện của các đóng góp năng lượng, chẳng hạn như axit amin, vitamin, cơ sở purine và pyrimidic.

Theo nghĩa này, triptein và peptone đậu nành cung cấp các chất dinh dưỡng này cho các vi sinh vật, do đó cho phép chúng phát triển đầy đủ. Tuy nhiên, đối với vi khuẩn đòi hỏi phải bổ sung agar này bằng máu đã được khử chuẩn hoặc máu nóng để tăng khả năng làm giàu của nó.

Mặt khác, nếu thêm kháng sinh vào môi trường, nó sẽ trở thành môi trường chọn lọc. Bạn cũng có thể thêm chiết xuất men 0,6% để ủng hộ việc phân lập các loài thuộc chi Listeria, đồng thời thêm cystine Tellurite và Máu cừu là lý tưởng cho Corynebacterium diphteriae.

Cuối cùng, natri clorua mang lại sự cân bằng thẩm thấu cho môi trường và agar cung cấp sự đồng nhất vững chắc.

Chuẩn bị

Tấm thạch đậu nành Tripticasein

Để chuẩn bị agar đậu nành trypticasein, 40 gram môi trường thương mại khử nước nên được cân trên quy mô kỹ thuật số. Hòa tan trong một lít nước cất có trong một fiola.

Hỗn hợp này được để yên trong 5 phút và sau đó được đưa đến nguồn nhiệt để hỗ trợ quá trình hòa tan môi trường. Nó nên được khuấy thường xuyên và để sôi trong 1 hoặc 2 phút. Sau đó, môi trường được khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Để nguội đến 50 ° C và phân phối trong đĩa Petri vô trùng. Để hóa rắn, đảo ngược, đặt hàng trong plaquers và lưu trữ trong tủ lạnh.

Độ pH cuối cùng của môi trường phải là 7,3 ± 0,2.

Cần lưu ý rằng màu của môi trường nuôi cấy mất nước là màu be nhạt và nên được lưu trữ trong khoảng từ 10 đến 35 ° C, ở nơi khô ráo.

Về phần mình, agar chuẩn bị là hổ phách nhẹ. Các tấm chuẩn bị nên được lưu trữ trong tủ lạnh (2 đến 8 ° C) cho đến khi sử dụng.

Các tấm phải đạt đến nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.

Tấm thạch đậu nành Tripticasein bổ sung máu

Agar máu được chuẩn bị bằng cách thêm 5% máu đã được khử chuẩn vào thời điểm làm lạnh agar đậu nành trypticasein ở 50 ° C. Hỗn hợp được đồng nhất bằng cách xoay với các chuyển động nhẹ nhàng.

Phục vụ trong các đĩa petri vô trùng. Màu của môi trường phải là màu đỏ anh đào.

Tấm thạch đậu nành Tripticasein bổ sung máu nóng

Để chuẩn bị môi trường thạch máu dựa trên TSA, các quy trình được mô tả ở trên là như nhau, nhưng khi rời nồi hấp, nó được phép đứng cho đến khi nhiệt độ của môi trường xấp xỉ từ 56 đến 70 ° C. Lúc đó máu được đặt và trộn cho đến khi môi trường chuyển sang màu nâu.

Phục vụ trong đĩa petri vô trùng. Màu của môi trường là màu nâu sô cô la.

Nêm của agar đậu nành tripticaseine

Quy trình chuẩn bị agar giống như quy trình được mô tả cho các đĩa, với sự khác biệt là thay vì phục vụ môi trường trên đĩa Petri, nó được phân phối từ 10 đến 12 ml trong các ống có nắp Bakelite trước khi khử trùng.

Sau đó, các ống được hấp khử trùng ở 121 ° C trong 15 phút. Khi rời đi, họ nghiêng mình với sự giúp đỡ của một người hỗ trợ và cho phép bản thân củng cố.

Các nêm đã chuẩn bị được gieo trên bề mặt và phục vụ để duy trì một số vi sinh vật khả thi không đòi hỏi, trong một thời gian xác định.

Công dụng

Agar đậu nành trypticasein được sử dụng trong các trường hợp sau:

-Là một cơ sở để chuẩn bị agar máu cổ điển được sử dụng thường xuyên trong hầu hết các phòng thí nghiệm.

-Sự phân lập vi khuẩn đòi hỏi.

-Quan sát mô hình tán huyết.

-Thực hiện các xét nghiệm chẩn đoán.

-Làm cơ sở để chuẩn bị thạch máu đặc biệt cho Corynebacterium diphteriae, với cystine Tellurium và máu cừu.

-Là cơ sở để chuẩn bị agar máu cừu, nhiều kanamycin-vancomycin cho sự phát triển của vi khuẩn kỵ khí, đặc biệt là Vi khuẩn sp.

-Để duy trì các chủng không đòi hỏi (Bacterioteca).

-Số lượng vi khuẩn hiếu khí trong nghiên cứu giới hạn vi sinh vật mẫu nước, môi trường, thực phẩm và mỹ phẩm.

Đã gieo

Các mẫu có thể được gieo trực tiếp trên bề mặt thạch đậu nành trypticasein bổ sung máu hoặc các chất phụ gia khác. Nó được gieo bởi kiệt sức.

Trong khi đó, các tấm thạch đậu nành tripticasein không có chất phụ gia thường được sử dụng để nuôi cấy các chủng vi sinh vật (vi khuẩn hoặc nấm men).

Kiểm soát chất lượng

Kiểm soát vô trùng

Để kiểm tra tính vô trùng của các môi trường khác nhau được điều chế bằng agar đậu nành trypticasein, nên làm như sau: từ mỗi mẻ được chuẩn bị, nên ủ một hoặc hai đĩa hoặc ống mà không cần tiêm ở 37 ° C trong 24 giờ để chứng minh tính vô trùng. Trong mọi trường hợp, nó phải duy trì mà không tăng trưởng.

Nếu ô nhiễm được tìm thấy, toàn bộ lô phải được loại bỏ.

Kiểm soát tăng trưởng

Để nghiên cứu hoạt động đúng của agar đậu nành trypticasein, có thể sử dụng các chủng vi khuẩn sau: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 và Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Các chủng được gieo và ủ trong aerobiosis ở 37 ° C trong 24 giờ.

Trong mọi trường hợp, sự tăng trưởng phải thỏa đáng.

Bạn cũng có thể sử dụng nấm làm Phức tạp Candida albicans ATCC 10231 và Aspergillus niger ATCC 16404. Dự kiến ​​sẽ có sự tăng trưởng tốt cho cả hai chủng.

Kiểm soát tăng trưởng và mô hình tán huyết của agar đậu nành tripticasein bổ sung máu

Để xác minh hoạt động chính xác của agar máu được chuẩn bị với cơ sở này, có thể sử dụng các chủng sau: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 và Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Chúng được gieo và ủ ở 37 ° C trong microaerophilicus trong 24 giờ.

Trong mọi trường hợp, sự tăng trưởng phải thỏa đáng, có tính đến S. pyogenes tan huyết beta (quầng sáng xung quanh thuộc địa) và trong cả hai chủng S. pneumoniae alpha tan máu (quầng xanh quanh các khuẩn lạc) nên được quan sát.

Tài liệu tham khảo

  1. Wikipedia đóng góp. Trypticase tôi là agar. Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 17 tháng 12 năm 2018, 15:47 UTC. Có sẵn tại: https://en.wikipedia.org
  2. Phòng thí nghiệm Britania. Thạch đậu nành tryteine. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  3. Phòng thí nghiệm Neogen Đậu tương ba lần. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Biên tập.
  5. Phòng thí nghiệm BD Trypticase tôi là Agar. 2014. Có sẵn tại: .bd.com