Agar TCBS nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch TCBS là môi trường nuôi cấy rắn có tính chọn lọc và khác biệt cao, được sử dụng để phân lập và nuôi cấy vi khuẩn Vibrio, đặc biệt là Vibrio cholerae, V. Vulnificus và V. parahaemolyticus là mầm bệnh chính của chi này.

Từ viết tắt TCBS có nghĩa là thiosulfate citrate mật sucrose. Môi trường thạch này còn được gọi là môi trường chọn lọc cho Vibrios. Công thức ban đầu được tạo ra bởi Nak Biếni và sau đó được sửa đổi bởi Kobayashi.

Nó bao gồm chiết xuất men, peptone thịt, triptein, natri citrate, natri thiosulfate, ox mật, sucrose, natri clorua, ferric citrate, xanh bromothymol, xanh thymol và agar.

Thành phần này cho phép phát triển đầy đủ các loài Vibrio từ nước, phân và mẫu thực phẩm; ngoại trừ Vibrio hollisae, Điều đó không phát triển trong phương tiện này. Ngoài ra, môi trường TCBS có khả năng ức chế sự phát triển của các vi khuẩn đi kèm khác, đặc biệt là coliforms.

Do các vấn đề nghiêm trọng về đường tiêu hóa và ngoài ruột mà một số loài thuộc chi Vibrio tạo ra, chẩn đoán của chúng là rất quan trọng. Con người bị nhiễm bệnh chủ yếu do tiêu thụ thực phẩm biển sống hoặc nấu chưa chín hoặc nước bị ô nhiễm, nhưng cũng do nhiễm trùng vết thương.

Do đó, các phòng thí nghiệm lâm sàng nên đưa môi trường thạch TCBS vào nghiên cứu nuôi cấy phân của mẫu phân lỏng, đặc biệt là với sự xuất hiện của nước gạo. Đặc biệt là nếu bệnh nhân báo cáo đã tiếp xúc với nước biển hoặc ăn hải sản hoặc cá.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
  • Chuẩn bị 2
  • 3 Sử dụng
  • 4 hạt giống
  • 5 giới hạn
  • 6 Kiểm soát chất lượng
  • 7 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Chiết xuất men, pepton thịt và triptein là nguồn dinh dưỡng của phương tiện này. Tuy nhiên, môi trường thạch TCBS là môi trường khắc nghiệt cho hầu hết các vi khuẩn.

Tính chọn lọc cao của nó được đưa ra bằng cách bổ sung natri citrat và ox mật; cả hai đều là tác nhân ức chế cũng cung cấp độ pH kiềm cho môi trường, hạn chế sự phát triển của hệ thực vật đi kèm và ủng hộ sự phát triển của V. dịch tả, Trong số các loài khác. Cần lưu ý rằng Vibrio cholerae rất nhạy cảm với chứng ợ nóng.

Về phần mình, natri clorua cân bằng thẩm thấu với môi trường. Ngoài ra, vì nồng độ của nó cao, nó cũng hoạt động như một chất ức chế, có lợi cho sự phát triển của vi khuẩn halophilic.

Sucrose là đường có thể lên men cùng với các chỉ số pH màu xanh của bromothymol và thymol màu xanh tạo ra đặc tính khác biệt cho môi trường. Vì lý do này, với điều này có nghĩa là có thể phân biệt các chủng lên men sucrose với các chủng không lên men.

Các khuẩn lạc của các chủng lên men sucrose phát triển màu vàng và sẽ biến môi trường từ màu xanh sang màu vàng do sản xuất axit. Các chất không lên men phát triển trong mờ và môi trường vẫn giữ nguyên màu gốc (màu xanh lá cây).

Tương tự như vậy, môi trường này chứa natri thiosulfate như một nguồn lưu huỳnh và citrate citrate như một tác nhân tiết lộ. Cả hai đều cho thấy vi khuẩn có khả năng sản xuất hydro sunfua (khí không màu). H2S được hình thành từ thiosulfate và sau đó phản ứng với ferric citrate một dạng kết tủa màu đen có thể nhìn thấy.

Cuối cùng, agar là thứ mang lại sự nhất quán vững chắc cho môi trường.

Chuẩn bị

Cân 89 gr môi trường khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Giúp giải thể bằng cách đun nóng và khuấy trộn thường xuyên. Hỗn hợp có thể được đun sôi trong 2 phút.

Phương tiện này không hấp. Sau khi hòa tan, nó được phục vụ trực tiếp trên đĩa vô trùng. Khi hóa rắn, chúng được sắp xếp theo cách đảo ngược trong các nhà sản xuất mảng bám và được bảo quản trong tủ lạnh (2-8 ° C) cho đến khi chúng được sử dụng.

Môi trường sau khi chuẩn bị nên ở pH 8,6 ± 0,2.

Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt hoặc xanh lục nhạt, và màu của môi trường là màu xanh lá cây hoặc màu xanh lục.

Điều quan trọng là để lại các tấm ủ trước khi gieo mẫu.

Sử dụng

Mẫu phổ biến nhất để phân lập Vibrios là phân tiêu chảy.

Các mẫu phân nếu chúng không thể được gieo ngay lập tức trên môi trường chọn lọc, phải được vận chuyển ở giữa Cary Blair.

Để tăng độ nhạy của môi trường nuôi cấy, phân có thể được truyền qua nước peptone ở pH 8.4 dưới dạng môi trường làm giàu tối đa trong 8 giờ, từ đó được cấy vào môi trường TCBS..

Cũng phải lưu ý rằng một số chủng Vibrios có thể gây nhiễm trùng máu ở bệnh nhân bị ức chế miễn dịch, vì vậy chúng có thể được phân lập từ nuôi cấy máu. Tương tự như vậy, các mẫu nước và thực phẩm từ biển có thể được phân tích khi có dịch bệnh dịch tả.

Đã gieo

Cấy mẫu của nghiên cứu phải nổi bật, việc gieo hạt được thực hiện bằng phương pháp tấn công bằng cách kiệt sức. Các tấm được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong aerobiosis.

Các thuộc địa được cho là của Vibrio cholerae Chúng có kích thước trung bình, mịn, đục, có cạnh mỏng và màu vàng vì chúng lên men sucrose..

Theo cách tương tự, các loài V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. wareissii, V. metschnikovii và một số V. âm hộ. Các loài Vibrios khác quan trọng về mặt lâm sàng như V. parahaemolyticus không lên men sucrose, phát triển như khuẩn lạc xanh ô liu.

Mặt khác, chúng ta phải nhớ rằng một số chủng Aeromonas và Plesiomonas là oxyase (+) có thể phát triển trong môi trường này, phát triển các khuẩn lạc màu vàng có thể gây nhầm lẫn cho bác sĩ lâm sàng. Trong khi một số chủng Pseudomonas cũng oxyase (+) phát triển thành khuẩn lạc xanh cũng như V. parahaemolyticus.

Giới hạn

Không nên thực hiện xét nghiệm oxyase dương tính với chi Vibrio từ các khuẩn lạc thu được từ môi trường TCBS, vì kết quả thu được sẽ là âm tính giả. Các hợp chất trong môi trường can thiệp mạnh vào thử nghiệm này. Vì vậy, nó nên được thực hiện từ cấy ghép trên môi trường thạch máu.

Kiểm soát chất lượng

Để chứng minh rằng môi trường ở trong tình trạng tốt, nên trồng các chủng đối chứng đã biết hoặc đã được chứng nhận và quan sát xem sự tăng trưởng có đáp ứng các đặc điểm dự kiến ​​hay không.

Đối với điều này, các chủng:

-Vibrio cholerae - Tăng trưởng đạt yêu cầu (khuẩn lạc màu vàng, viền mờ).

-Vibrio parahaemolyticus - Tăng trưởng thỏa đáng (thuộc địa với trung tâm màu xanh lá cây và đường viền mờ).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tăng trưởng thỏa đáng (khuẩn lạc màu vàng với quầng cùng màu xung quanh thuộc địa).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - ức chế toàn bộ hoặc một phần (khuẩn lạc nhỏ màu vàng hoặc mờ).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- ức chế một phần hoặc toàn bộ (khuẩn lạc màu xanh).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Bị ức chế hoàn toàn.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Ức chế toàn bộ hoặc một phần. (Trung tâm khuẩn lạc nhỏ màu xanh lục cạnh).

Ủ môi trường không được nuôi cấy không nên thay đổi.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm Difco Francisco Soria Melguizo. Thạch TCBS. 2009. Có sẵn tại: f-soria.es
  2. Phòng thí nghiệm BD. BD. TCBS Agar 2003. Có sẵn trên: bd.com
  3. Phòng thí nghiệm Britania. TCBS Trung bình. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  4. Phòng thí nghiệm Acumedia TCBS Agar. 2016. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Tái bản lần thứ 5 Biên tập Panamericana S.A. Argentina.