Chia sẻ:
Agar Thayer Martin nền tảng, chuẩn bị và sử dụng
các Thạch Thayer Martin Nó là một môi trường rắn rất bổ dưỡng và chọn lọc để phân lập Neisseria meningitidis và Neisseria gonorrhoeae; cả hai đều được gọi là Neisseria gây bệnh hoặc lâm sàng quan trọng.
Một trong những tính năng đặc biệt quan trọng nhất của thạch Thayer Martin là hàm lượng bổ sung dinh dưỡng cao. Tài sản này là không thể thiếu, bởi vì Neisserias là những vi sinh vật rất đòi hỏi từ quan điểm dinh dưỡng và do đó không phát triển trong các phương tiện truyền thông phổ biến.
Mặt khác, vì những vi sinh vật này thường được tìm thấy ở những khu vực không vô trùng, việc bổ sung các chất ức chế cản trở sự phát triển của hệ thực vật đi kèm là cần thiết, mà không ảnh hưởng đến sự phát triển của chi Neisseria..
Agar này bao gồm agar cơ sở GC, hemoglobin, bổ sung dinh dưỡng bổ sung và một phức hợp các chất ức chế (kháng sinh và thuốc chống nấm). Nhà thương mại bán riêng từng phần bổ sung.
Mẫu được trồng trong môi trường này sẽ phụ thuộc vào vi sinh vật đang được tìm kiếm. Để Neisseria bệnh lậu Các mẫu lý tưởng là dịch tiết âm đạo và niệu đạo. Trong khi cho Neisseria meningitidis các mẫu được sử dụng nhiều nhất là dịch tiết CSF, hầu họng và mũi họng.
Chỉ số
- 1 nền tảng
- 1.1 agar cơ sở
- 1.2 Huyết sắc tố
- 1.3 Bổ sung làm giàu
- 1.4 Chất ức chế
- Chuẩn bị 2
- 2.1 Thay đổi gốc Martin Agar
- 2.2 Agar Thayer Martin đã sửa đổi
- 3 Sử dụng
- 4 Kiểm soát chất lượng
- 5 hạn chế
- 6 tài liệu tham khảo
Nền tảng
Neisserias là các vi sinh vật được phân loại là khó chịu và do đó việc phân lập chúng là khó khăn. Vì lý do này, Thayer Martín là một phương tiện phức tạp và mỗi thành phần của nó đáp ứng một chức năng được giải thích dưới đây:
Môi trường lõi GC
GC agar chứa peptone proteose, tinh bột ngô, natri clorua, dipotosphat kali, monopotali phosphate và agar-agar. Các thành phần của nó cung cấp các chất dinh dưỡng cơ bản cho sự phát triển của vi sinh vật, trung hòa các axit béo độc hại, góp phần duy trì sự cân bằng thẩm thấu, xác định pH và cung cấp sự nhất quán vững chắc cho môi trường.
Huyết sắc tố
Hemoglobin cung cấp các yếu tố V và X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD và hemin, tương ứng). Do đó, trong môi trường này, loài Haemophilus cũng phát triển. Huyết sắc tố có thể được lấy thương mại ở dạng mất nước hoặc máu bò đã được khử rung tươi có thể được thêm vào môi trường.
Bổ sung làm giàu
Mặt khác, một chất bổ sung làm giàu phải được thêm vào môi trường Thayer-Martin, vì các chất dinh dưỡng có trong agar cơ sở không đủ cho các yêu cầu của chi Neisseria..
Bổ sung làm giàu được sử dụng phổ biến nhất được gọi là isovitalex. Nó chứa glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, p-amino benzoic acid, vitamin B12, thiamin và glucose. Tất cả các hợp chất này là cần thiết cho sự phát triển đúng đắn của Neisseria gây bệnh.
Các chất ức chế
Vì là môi trường dinh dưỡng cao, nên các chất ức chế phải được sử dụng để ngăn chặn sự phát triển của các vi sinh vật trong hệ thực vật thông thường của khu vực và do đó ủng hộ sự phân lập của chi Neisseria..
Phức hợp ức chế bao gồm vancomycin, colistin và nystatin. Vancomycin ức chế sự phát triển của vi khuẩn gram dương, colistin ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn gram âm như Pseudomonas và một số Neisseria hoại sinh, và nystatin tác động lên nấm men như Candida albicans.
Tuy nhiên, sau đó thạch Thayer Martin đã được sửa đổi; những thay đổi bao gồm bổ sung trimethoprim, tăng lượng agar và bổ sung thêm glucose. Những thay đổi này đã cải thiện đáng kể sự phục hồi của các loài Neisseria gonorrhoeae.
Cần lưu ý rằng trimethoprim ức chế sự phát triển của chi Proteus và hậu quả của nó là hình thành bầy đàn. Theo nghĩa này, kháng sinh là thứ cung cấp tính chất chọn lọc cho môi trường Thayer Martin.
Chuẩn bị
Thayer Martin Agar gốc
-Agar
Cân 8.2 gr môi trường GC khử nước và huyền phù trong 100 ml. Trộn và đun sôi trong 1 phút với việc khuấy thường xuyên để hòa tan hoàn toàn. Khử trùng hỗn hợp trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.
-Huyết sắc tố 2%
Đình chỉ 2 g huyết sắc tố khử nước trong 2 hoặc 3 ml nước cất nóng để tạo thành một hỗn hợp đồng nhất. Thêm từng chút nước để hoàn thành thể tích 100 ml. Việc đình chỉ phải đồng nhất trước khi khử trùng.
Tiệt trùng trong nồi hấp trong 15 phút.
-Bổ sung làm giàu
Hoàn nguyên con đường thương mại với chất pha loãng được cung cấp bởi cùng một nhà thương mại. Trộn đều. Lượng chất pha loãng được sử dụng sẽ được chỉ định trong hướng dẫn bộ..
-Ức chế bổ sung V.C.N (vancomycin, colistin, nystatin)
Hoàn nguyên lọ thuốc với chất pha loãng được cung cấp bởi nhà thương mại. Trộn đều. Lượng chất pha loãng được sử dụng sẽ được chỉ định trong hướng dẫn bộ..
-Chuẩn bị
Cứ 100 ml agar GC tiến hành như sau:
Khi agar rời khỏi nồi hấp, để nguội đến nhiệt độ khoảng 50 ° C và thêm 2 ml dung dịch hemoglobin đã chuẩn bị, 2 ml chất bổ sung làm giàu (isobitalex hoặc britalex) và 2 ml chất bổ sung ức chế. Trộn và phục vụ trong đĩa petri vô trùng.
Cho phép hóa rắn và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng.
Màu của môi trường chuẩn bị là màu đỏ anh đào. Độ pH cuối cùng của môi trường là 7,2 ± 0,2
Thay đổi Martin Agar
Cân 8.2 gr môi trường GC khử nước và huyền phù trong 100 ml. Thêm 1 g agar và thêm 0,3 g glucose. Trộn và đun sôi trong 1 phút với việc khuấy thường xuyên để hòa tan hoàn toàn. Khử trùng hỗn hợp trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.
Chuẩn bị huyết sắc tố và bổ sung làm giàu như mô tả ở trên.
Chất bổ sung ức chế được sử dụng là V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).
-Chuẩn bị
Tiến hành như mô tả cho thạch Thayer Martin ban đầu.
Sử dụng
Môi trường Thayer Martin nên được tôi luyện trước khi gieo các mẫu. Các mẫu thường được sử dụng là dịch tiết họng, dịch tiết mũi, âm đạo, niệu đạo và / hoặc bài tiết trực tràng và CSF..
Sử dụng các mẫu mới lấy và thực hiện inocula mạnh trên môi trường thạch. Các mẫu được gieo trực tiếp bằng cách xả vật liệu và sau đó nổi lên bởi sự cạn kiệt trên bề mặt.
Các tấm được ủ ở 35-37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong bình microaerophilic (5% CO2). Vào cuối giai đoạn ủ bệnh, các đĩa được kiểm tra các khuẩn lạc nhỏ, màu xám và đôi khi giống như chất nhầy..
Thực hiện các xét nghiệm sinh hóa Gram và xác nhận cho các khuẩn lạc đáng ngờ.
Kiểm soát chất lượng
Để thực hiện kiểm soát chất lượng của môi trường Thayer Martin, có thể sử dụng các chủng vi sinh vật sau đây.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 và Neisseria meningitidis ATCC 13090; trong cả hai chủng, sự phát triển thỏa đáng được mong đợi.
Các chủng sau đây cũng nên được bao gồm: Staphylococcus biểu bì ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 và Candida albicans ATCC 10231. Trong tất cả chúng, sự ức chế toàn bộ hoặc một phần được dự kiến trong phương tiện này.
Hạn chế
-Cần phải lưu ý rằng vi khuẩn kháng các chất ức chế được sử dụng có thể phát triển trong môi trường..
-Có chủng Neisseria bệnh lậu có thể nhạy cảm với nồng độ vancomycin được sử dụng. Vì lý do này, nên sử dụng song song sô cô la với isovitalex, nhưng không có chất ức chế.
-Có những chủng nấm men kháng nystatin có thể phát triển trong môi trường này và cản trở sự phân lập Neisseria gây bệnh, đặc biệt là gonococci..
Tài liệu tham khảo
- Phòng thí nghiệm chẩn đoán Valtek. Agar Thayer-Martin.2016. Có sẵn trong: com
- Phòng thí nghiệm Britania. Thayer Martin Sửa đổi Trung bình. 2010. Có sẵn tại: britanialab.com
- Wikipedia đóng góp. Môi trường Thayer-Martin. Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 26 tháng 10 năm 2017, 16:33 UTC. Có sẵn tại: wikipedia.org4. Truy cập ngày 28 tháng 2 năm 2019.
- Phòng thí nghiệm Britania. Môi trường thạch. 2010. Có sẵn tại: britanialab.com.
- Phòng thí nghiệm BBL ™ Làm giàu trung bình cho các vi sinh vật khó tính. 1999. Có sẵn trong: bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.