Agar TSI nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch TSI hoặc agar sắt ba đường là một môi trường nuôi cấy rắn phục vụ như một xét nghiệm sinh hóa để hướng dẫn xác định ban đầu của trực khuẩn Gram âm. Nó dựa trên việc chứng minh quá trình lên men của đường và sản xuất hydro sunfua và khí.

Thành phần và nền tảng của nó rất giống với xét nghiệm sắt Kligler, với sự khác biệt là loại thứ hai chỉ chứa glucose và đường sữa. Thay vào đó, như tên gọi của nó, sắt ba có chứa ba loại carbohydrate có thể lên men: glucose, lactose và sucrose..

Ngoài ra, môi trường TSI có bốn dẫn xuất protein làm cho nó trở thành một loại thạch rất bổ dưỡng: chiết xuất men, chiết xuất thịt, peptone và peptone proteose. Nó cũng chứa sắt ammonium sulfate, natri thiosulfate, natri clorua, phenol đỏ và agar.

Sự bất lực của vi sinh vật lên men glucose có trong môi trường ngay lập tức loại trừ nó khỏi thuộc họ Enterobacteriaceae. Do đó, xét nghiệm này là điều cần thiết để quyết định tuyến đường nhận dạng nào cần được thực hiện để xác định chi và loài.

Mỗi phòng thí nghiệm quyết định liệu nó hoạt động với môi trường thạch TSI hay agar Kligler.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Natri clorua và agar
    • Chỉ thị pH 1,2 (đỏ phenol)
    • 1.3 Dẫn xuất protein (chiết xuất men, chiết xuất thịt, peptone và peptone proteose)
    • 1.4 Lên men carbohydrate (glucose, lactose và sucrose)
    • 1.5 Sản xuất gas
    • 1.6 Natri thiosulfate và sắt ammonium sulphate (sản xuất hydro sunfua)
  • Chuẩn bị 2
  • 3 công dụng
  • 4 hạt giống
  • 5 hạn chế
  • 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Mỗi một trong số các hợp chất đáp ứng một chức năng trong môi trường.

Natri clorua và agar

Natri clorua là cần thiết để duy trì trạng thái cân bằng thẩm thấu của môi trường. Trong khi agar cho sự thống nhất vững chắc.

Chỉ thị PH (đỏ phenol)

Độ pH của môi trường chuẩn bị được cân bằng đến 7,3 và chỉ số pH (đỏ phenol) chuyển sang màu vàng dưới 6,8. Điều này có nghĩa là một lượng nhỏ axit được tạo ra từ quá trình lên men đường sẽ biến môi trường từ màu đỏ cam sang màu vàng.

Nếu quá trình lên men không xảy ra, sẽ có sự kiềm hóa môi trường bằng cách sử dụng pepton, chuyển từ màu đỏ cam sang màu đỏ mạnh.

Dẫn xuất protein (chiết xuất men, chiết xuất thịt, peptone và peptone proteose)

Khi vi khuẩn chuyển hóa các protein có trong môi trường thạch TSI, các amin được tạo ra để kiềm hóa môi trường (chủ yếu ở mức độ vát), vì phản ứng cần oxy. Các amin biến vòng bezel thành màu đỏ mạnh mẽ.

Nhưng điều này sẽ phụ thuộc vào khả năng vi khuẩn lên men carbohydrate hay không.

Lên men carbohydrate (glucose, lactose và sucrose)

Nghiên cứu về quá trình lên men của đường có thể đưa ra một số hình ảnh và mỗi hình ảnh được diễn giải khác nhau. Việc giải thích thử nghiệm chia các vi sinh vật thành 3 loại: lên men không glucose, lên men không đường và đường lên men đường sữa / đường sucrose.

Cần lưu ý rằng lượng glucose trong môi trường bị hạn chế, trong khi nồng độ của đường sữa và sucrose cao gấp 10 lần.

Các vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae và các vi sinh vật lên men glucose khác sẽ bắt đầu lên men loại đường này vì đây là loại carbohydrate đơn giản nhất cho năng lượng..

Mặt khác, đường sữa và đường sucrose là những carbohydrate phức tạp phải được phân hủy và chuyển đổi thành glucose để chúng có thể đi vào chu trình Embden-Meyerhof.

-Các vi sinh vật glucose không lên men

Khi vi sinh vật bị nhiễm bệnh không thể lên men glucose, ít có thể lên men các carbohydrate khác. Do đó, axit không được hình thành ở đây, nhưng có sự hình thành amin trong góc xiên do sử dụng peptones.

Trong trường hợp này, góc xiên chuyển sang màu đỏ mạnh hơn và đáy ống có thể không thay đổi hoặc cũng có thể bị kiềm hóa, để lại toàn bộ ống màu đỏ.

Giải thích: K / K có nghĩa là nền vát / kiềm hoặc trung tính kiềm

Trong hình ảnh ở đầu bài viết, xem hình ảnh của ống D.

Kết quả này chỉ ra rằng vi sinh vật không thuộc họ Enterobacteriaceae.

-Các vi sinh vật không lên men của đường sữa / sucrose

Nếu vi khuẩn có thể lên men glucose nhưng không có đường sữa hoặc sucrose, điều sau đây sẽ xảy ra:

Vi khuẩn sẽ tiêu thụ tất cả glucose có sau khoảng 6 đến 8 giờ, có khả năng axit hóa cả vát và taco; đó là, agar sẽ hoàn toàn chuyển sang màu vàng. Nhưng khi glucose bị cạn kiệt và không thể sử dụng đường sữa và sucrose, vi khuẩn sẽ bắt đầu chuyển hóa protein.

Phản ứng này cần oxy, do đó sự thoái hóa của pepton xảy ra trên bề mặt (góc xiên). Các amin sản xuất kiềm hóa khung bezel bằng cách chuyển màu vàng sang màu đỏ. Phản ứng này được chứng minh vào lúc 18 đến 24 giờ ủ.

Giải thích: K / A có nghĩa là vát kiềm và taco axit.

Trong hình ảnh ở đầu bài viết, xem hình ảnh của ống B.

-Vi sinh vật lên men Lactose / sucrose

Rõ ràng, các vi sinh vật có khả năng lên men đường sữa và đường sucrose có thể lên men glucose. Sau khi lượng glucose tối thiểu có trong môi trường cạn kiệt, pyruvate được hình thành bắt đầu chuyển hóa để tạo thành axit thông qua chu trình hiếu khí của Krebs, và trong khoảng thời gian 8 đến 12 giờ tất cả môi trường sẽ có màu vàng.

Nếu vi khuẩn có khả năng phân tách đường sữa hoặc sucrose, axit sẽ tiếp tục được sản xuất và sau 18 đến 24 giờ, toàn bộ ống - mỏ và taco - sẽ vẫn có màu vàng.

Cần lưu ý rằng việc sử dụng glucose được thực hiện theo hai cách: một ở dạng hiếu khí trong góc xiên của ống và một cách khác yếm khí ở đáy ống.

Giải thích: A / A có nghĩa là vát axit / đáy axit. Nó có thể xuất hiện khí hay không.

Trong hình ảnh ở đầu bài viết, xem hình ảnh của ống A.

Sản xuất gas

Một số vi sinh vật có khả năng tạo ra khí trong quá trình lên men đường. Khí được chứng minh trong ống bằng áp suất mà nó tác động bên trong môi trường thạch. Áp suất gây ra sự hình thành bong bóng hoặc sự dịch chuyển của môi trường thạch. Đôi khi sự hình thành khí có thể làm gãy môi trường.

Điều quan trọng là tại thời điểm gieo hạt môi trường TSI, việc chọc thủng được thực hiện sạch sẽ bởi trung tâm của thạch cho đến khi nó chạm đáy. Nếu lỗ thủng được chuyển hướng về phía thành của ống, nó có thể gây ra dương tính giả trong quá trình sản xuất khí, vì nó sẽ thoát qua kênh hình thành sai.

Việc sản xuất khí, cũng như các phản ứng xảy ra trong môi trường thạch, cần oxy, do đó, ống được phủ bằng một nút bông, và nếu sử dụng nắp bakelite, không nên điều chỉnh hoàn toàn.

Sản xuất khí được báo cáo là dương (+) hoặc âm (-).

Natri thiosulfate và sắt amoni sulfat (sản xuất hydro sunfua)

Vi khuẩn có khả năng sản xuất hydro sunfua (khí không màu), lấy lưu huỳnh của natri thiosulfate có trong môi trường. Khi H được hình thành2S phản ứng với sắt amoni sunfat, tạo ra sunfua sắt (kết tủa màu đen có thể nhìn thấy rõ).

Việc sản xuất của H2S được báo cáo là dương (+) hoặc âm (-).

Trong hình ảnh ở đầu bài viết, xem hình ảnh của ống C.

Chuẩn bị

Cân 62,5 gr agar đường ba mất nước (TSI) và hòa tan trong một lít nước cất.

Đun cho đến khi agar tan hoàn toàn. Đun sôi trong một phút khuấy thường xuyên. Phân phối 4 ml môi trường trong 13/100 ống nghiệm có nắp bông.

Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Di chuyển khỏi nồi hấp và cho phép nghỉ ngơi theo cách nghiêng. Phải cẩn thận rằng cả đế và khung có cùng khoảng cách.

Bảo quản trong tủ lạnh 2-8 ° C. Để ủ trước khi trồng chủng vi khuẩn.

Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt và môi trường chuẩn bị là màu đỏ cam

Độ pH cuối cùng của môi trường chuẩn bị là 7,3 ± 0,2.

Công dụng

Xét nghiệm TSI được sử dụng rộng rãi ở cấp độ của phòng thí nghiệm vi sinh. Thử nghiệm này là rất cần thiết để hướng dẫn loại thử nghiệm phải được áp dụng để đi đến việc xác định chi và loài. Nó thực hiện tốt và giải thích có thể tiết kiệm vật liệu và công việc.

Nếu kết quả là TSI K / K và xét nghiệm cytochrom oxydase dương tính, người ta biết rằng các xét nghiệm nên được sử dụng để xác định trực khuẩn Gram âm không lên men, như Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, trong số các chi khác. Nếu nó là oxyase âm tính, nó được định hướng theo các chi Acinetobacter, Stenotrophomonas, v.v..

Mặt khác, nếu thu được TSI A / A hoặc K / A và xét nghiệm cytochrom oxydase âm tính, càng nhiều nitrat bị khử thành nitrit, chúng tôi sẽ chắc chắn rằng đây là một vi sinh vật thuộc họ Enterobacteriaceae. Trong trường hợp này, tuyến nhận dạng sẽ được định hướng để kiểm tra cụ thể cho nhóm vi khuẩn này.

Mặt khác, nếu thu được hình ảnh K / A hoặc A / A và xét nghiệm cytochrom oxydase dương tính, các xét nghiệm bổ sung sẽ được gắn vào sẽ xác định các chủng lên men không thuộc họ Enterobacteriaceae, như: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio và Pasteurella.

Một TSI với hydro sulfide, oxyase âm tính, sẽ hướng dẫn việc xác định các chi sau của họ Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella hoặc Salmonella.

Một TSI với hydro sunfua khan hiếm hoặc vừa phải trong vát kiềm có đáy kiềm và oxyase dương sẽ hướng dẫn sử dụng các xét nghiệm để xác định trực khuẩn Gram âm, không lên men sản xuất H2S, chẳng hạn như Shewanella putrefaciens.

Cuối cùng, TSI có thể được sử dụng để điều tra việc sản xuất hydro sunfua trong trực khuẩn Gram dương, đặc biệt là khi nghi ngờ Erysipelothrix rhusiopathiae.

Đã gieo

Môi trường TSI phải được cấy với các khuẩn lạc tinh khiết, được phân lập trong môi trường nuôi cấy sơ cấp hoặc chọn lọc. Nếu thuộc địa được lấy từ môi trường chọn lọc được gieo hạt với các mẫu thực vật hỗn hợp, thì nên cẩn thận chỉ lấy bề mặt, vì ở phần dưới của thuộc địa có thể có các chủng khả thi bị ức chế trong môi trường đó.

Do đó, vòng lặp không bao giờ được làm mát trong môi trường chọn lọc để sau đó lấy khuẩn lạc và cấy môi trường TSI.

Việc trồng cây sẽ được thực hiện với một vòng thẳng hoặc kim. Một lỗ thủng sẽ được thực hiện, chú ý rằng nó đi qua trung tâm của giữa cho đến khi chạm đáy, và sau đó việc trồng cây được hoàn thành cấy bề mặt theo cách ngoằn ngoèo. Không làm hai vết thủng.

Ủ ở 37 ° C trong aerobiosis trong 18-24 giờ. Phiên dịch tại thời điểm này, không phải trước hay sau.

Hạn chế

Bài kiểm tra TSI nên được đọc trong khoảng từ 18 đến 24 giờ ủ. Việc đọc trước thời điểm này có thể cho kết quả dương tính giả của A / A. Trong khi đó, việc đọc sau thời gian này có thể làm phát sinh hình ảnh âm tính giả của chất không lên men, do việc tiêu thụ pepton làm kiềm hóa môi trường.

Tài liệu tham khảo

  1. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Tái bản lần 3 Biên tập Panamericana. Thủ đô Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Tái bản lần thứ 5 Biên tập Panamericana S.A. Argentina.
  4. "Thạch TSI." Wikipedia, bách khoa toàn thư miễn phí. 10 tháng 7 năm 2018, 08:09 UTC. Ngày 10 tháng 2 năm 2019, 03:33 Có sẵn tại: en.wikipedia.org
  5. Phòng thí nghiệm Britania. TSI Agar (Thạch đường ba sắt). 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  6. Phòng thí nghiệm BD Agar sắt đường ba (TSI Agar). 2003. Có sẵn trên: bd.com