Nền thạch xanh tươi, chuẩn bị và sử dụng



các thạch xanh tươi nó là một môi trường nuôi cấy rắn, với mức độ chọn lọc cao. Nó được sử dụng riêng cho việc phân lập các chủng của chi Salmonella, tuy nhiên có một số trường hợp ngoại lệ, chẳng hạn như các loài typhi và paratyphi không phát triển trong môi trường này.

Việc tìm kiếm chi Salmonella thường xuyên trong các mẫu phân, nước hoặc thực phẩm. Theo nghĩa này, phương tiện này có thể rất hữu ích. Agar này được tạo ra vào năm 1925 bởi Kristensen, Lester và Jurgens, sau đó được sửa đổi bởi Kauffmann.

Nó bao gồm pluripepton từ tiêu hóa mô động vật và tiêu hóa casein của tụy, cũng chứa chiết xuất men, natri clorua, lactose, sucrose, đỏ phenol, xanh lá cây tươi và agar-agar.

Nó được đặc trưng bởi là một môi trường rất khó thở đối với hầu hết các vi khuẩn, ủng hộ sự phát triển của Salmonella, tuy nhiên một số coliform có thể tồn tại trong đó, phát triển yếu.

Điều quan trọng là phải nhấn mạnh rằng trong phương tiện này, chi Shigella không phát triển và cũng không Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Do đó, nếu muốn cách ly các vi sinh vật này, nên sử dụng các phương tiện khác, chẳng hạn như agar XLD, trong số các phương tiện khác..

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 agar xanh tươi
    • 1.2 Biến thể của môi trường thạch màu xanh lá cây tươi sáng (BGA)
  • Chuẩn bị 2
  • 3 công dụng / ứng dụng
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Thạch xanh tươi

Mỗi thành phần tạo nên môi trường có một chức năng cụ thể xác định các đặc tính và tính chất của agar.

Pluripeptonas và chiết xuất nấm men là nguồn dinh dưỡng từ đó các vi sinh vật lấy nitơ và khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của chúng. Lactose và sucrose là nguồn năng lượng cho các vi sinh vật có khả năng lên men chúng.

Màu xanh lá cây tươi sáng là chất ức chế ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn gram dương và một số lượng lớn vi sinh vật gram âm.

Natri clorua cung cấp sự ổn định thẩm thấu cho môi trường. Trong khi phenol đỏ là chỉ số của pH, nó chuyển màu khi phát hiện sự sản xuất axit từ quá trình lên men của carbohydrate.

Các khuẩn lạc không lên men của đường sữa và sucrose phát triển trong môi trường này có màu trắng, hồng hoặc trong suốt, trên nền đỏ. Ví dụ, vi khuẩn thuộc chi Salmonella.

Trong khi vi khuẩn lên men đường sữa hoặc sucrose có khả năng phát triển trong môi trường này, chúng phát triển các khuẩn lạc màu vàng lục hoặc vàng lục trên nền màu vàng lục. Ví dụ, Escherichia coli và Klebsiella pneumoniae.

Các biến thể của agar xanh tươi (BGA)

Có các biến thể khác của agar xanh tươi; agobiocin agar xanh tươi glucose (NBG) và agobiocin agar xanh tươi glycerol lactose (NBGL).

Novobiocin agar glucose xanh tươi (NBG)

Chứa trypticase agar đậu nành, ferric ammonium citrate, sodium thiosulfate pentahydrate, phenol red, glucose, green green, novobiocin và nước cất.

Phục vụ phân lập khuẩn lạc Salmonella từ mẫu phân.

Trong trường hợp này, màu xanh lá cây tươi sáng và novobiocin là những chất ức chế ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn gram dương và một số vi sinh vật gram âm.

Natri thiosulfate là nguồn lưu huỳnh và ferric citrate là nguồn sắt, cả hai đều cần thiết để tiết lộ việc sản xuất hydro sunfua thông qua sự hình thành kết tủa đen của sunfua sắt.

Glucose là carbohydrate lên men và phenol đỏ là chỉ số pH.

Trong môi trường này, các khuẩn lạc Salmonella phát triển lớn với một trung tâm màu đen được bao quanh bởi một quầng sáng màu đỏ và tiếp theo là một khu vực nhìn thấy rõ ràng. Một số chủng Citrobacter freundii sản xuất khuẩn lạc giống hệt Salmonella.

Agobiocin agar glycerol màu xanh lá cây tươi sáng (NBGL)

Môi trường này chứa agar đậu nành trypticase, ferric ammonium citrate, natri thiosulfate, lactose, glycerol, màu xanh lá cây tươi sáng, novobiocin và nước cất.

Sự khác biệt của môi trường này với môi trường trước đó là glucose được thay thế bằng đường sữa và glycerol và phenol đỏ không được sử dụng.

Môi trường cũng được sử dụng để phân lập các loài Salmonella, các khuẩn lạc phát triển màu đen, bằng cách sản xuất hydro sunfua.

Chỉ các khuẩn lạc không sản xuất axit từ glycerol hoặc lactose mới đạt được sản xuất H2Thế là đủ, vì độ pH thấp cản trở sự hình thành của H2S. Điều này dẫn đến các khuẩn lạc không màu đối với hầu hết các loài Proteus và Citrobacter.

Chuẩn bị

-Cân 58 gram môi trường khử nước thương mại thu được. Thêm nó trong một lít nước cất hai lần. Trộn, để yên trong vài phút và gửi chuẩn bị đến nguồn nhiệt cho đến khi tan hoàn toàn.

-Nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút, không vượt quá thời gian khử trùng.

-Hãy đứng và phục vụ thậm chí nóng trong các đĩa petri vô trùng. Độ pH cuối cùng phải là 6,9 ± 0,2.

-Cho phép hóa rắn và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Trước khi trồng các tấm nên lấy nhiệt độ phòng.

-Môi trường bột có màu xanh lá cây và sẵn sàng để có màu nâu cam hoặc xanh đỏ, tùy thuộc vào độ pH và nhà thương mại. Một màu rất nâu là dấu hiệu cho thấy thạch đã quá nóng.

-Sau khi agar được đông cứng, không nên dùng lại, vì môi trường bị hư hỏng.

Sử dụng / ứng dụng

Phương tiện này được sử dụng để tìm kiếm các chủng Salmonella từ mẫu phân và thực phẩm từ sữa, trong số những loại khác..

Vì nó là một môi trường khá khắc nghiệt, nên trồng một lượng cấy dồi dào nếu sử dụng mẫu trực tiếp. Mặt khác, nên làm giàu trước và làm giàu mẫu vật trước khi trồng trong môi trường này.

Vì một số chủng Salmonella bị ức chế hoặc phát triển khó khăn, nên đi cùng với phương tiện này với các loại thạch chọn lọc khác cho Salmonella.

Tất cả các khuẩn lạc có Salmonella đặc trưng phải được kiểm tra sinh hóa để xác định chính xác.

Kiểm soát chất lượng

Để kiểm tra hoạt động tốt của môi trường thạch màu xanh lá cây tươi sáng, các chủng ATCC có thể được sử dụng để quan sát sự phát triển tương tự trên nó..

Các chủng thường xuyên nhất được sử dụng để kiểm soát chất lượng là: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Viêm phổi do Klebsiella ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

3 đầu tiên phải cho các khuẩn lạc màu trắng hoặc trong suốt trên nền đỏ. Salmonella với sự phát triển tốt và Proteus với sự tăng trưởng thưa thớt hoặc thường xuyên.

Klebsiella và Escherichia được dự kiến ​​là khuẩn lạc màu vàng vàng với nền màu vàng và trong trường hợp Shigella và Staphylococcus nên bị ức chế.

Môi trường khử nước nên được bảo quản ở nhiệt độ phòng, nơi khô ráo, vì môi trường rất hút ẩm.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm Difco Francisco Soria Melguizo S.A. Agar xanh rực rỡ. 2009
  2. Phòng thí nghiệm Anh Agar xanh tươi. 2015.
  3. Phòng thí nghiệm BD. Agar xanh rực rỡ. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Tái bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh học của Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Biên tập