Vogel-Johnson Agar nền tảng, chuẩn bị và sử dụng



các Thạch Vogel-Johnson là một môi trường nuôi cấy rắn, chọn lọc và khác biệt, được đặc chế để phân lập Staphylococcus aureus. Phương tiện này được tạo ra bởi Vogel và Johnson vào năm 1960 từ việc sửa đổi agar glycine Tellurite được xây dựng vào năm 1955 bởi Zebovitz, Evans và Niven.

Việc sửa đổi bao gồm tăng nồng độ mannitol có trong môi trường và kết hợp với chất chỉ thị pH. Công thức hiện tại bao gồm triptein, chiết xuất nấm men, mannitol, dipotali phosphate, lithium clorua, glycine, phenol đỏ, agar, dung dịch kali Tellurite 1% và nước.

Cần lưu ý rằng có những phương tiện khác, như môi trường thạch Vogel-Johnson, được chọn lọc để phân lập S. aureus, chẳng hạn như agar mannitol muối và agar Baird Parker. Theo nghĩa này, có thể nói rằng nền tảng của thạch Vogel-Johnson là hỗn hợp giữa agar mannitol mặn và agar Baird Parker..

Trong các thuộc địa đầu tiên của S. aureus Chúng được phân biệt bằng cách lên men mannitol và biến chất chỉ thị pH thành màu vàng. Mặt khác, trong lần thứ hai S. aureus nó được đặc trưng bằng cách khử Tellurite thành Tellurium và tạo thành các khuẩn lạc màu xám sang đen. Cả hai tính chất được quan sát trong môi trường thạch Vogel-Johnson.

Phương tiện này, giống như các đối tác của nó, rất hữu ích cho việc phát hiện Staphylococcus aureus trong các mẫu thực phẩm, kiểm soát vệ sinh của các sản phẩm công nghiệp và trong các mẫu lâm sàng.

Chỉ số

  • 1 nền tảng
    • 1.1 Đóng góp chất dinh dưỡng
    • 1.2 Sức mạnh chọn lọc
    • 1.3 Sức mạnh khác biệt
    • 1.4 Cân bằng thẩm thấu và chất hóa rắn
  • Chuẩn bị 2
    • 2.1 1% w / v dung dịch kali Tellurite
    • 2.2 Môi trường thạch Vogel-Johnson
  • 3 Sử dụng
  • 4 Kiểm soát chất lượng
  • 5 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Đóng góp chất dinh dưỡng

Môi trường Vogel-Johnson chứa triptein và chiết xuất men; cả hai chất này đều cung cấp các axit amin chuỗi dài đóng vai trò là nguồn carbon và nitơ cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn. Vi khuẩn có khả năng phát triển trong môi trường này sẽ lấy chất dinh dưỡng từ các chất này.

Sức mạnh chọn lọc

Môi trường thạch Vogel-Johnson có khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn gram âm và thậm chí một số vi khuẩn gram dương, thuận lợi cho sự phát triển của tụ cầu khuẩn coagulase dương tính. Các chất ức chế là kali Tellurite, lithium clorua và glycine.

Sức mạnh khác biệt

Các chất tạo ra môi trường khác biệt này là mannitol và kali Tellurite. Mannitol là một carbohydrate, và khi nó được lên men, các axit được tạo ra để chuyển môi trường từ màu đỏ sang màu vàng, điều này xảy ra nhờ sự hiện diện của chất chỉ thị pH đỏ phenol.

Trong khi, Tellurite không màu khi được khử thành Telluride không có kim loại, có màu xám đậm đến đen.

các Staphylococcus aureus lên men mannitol và làm giảm Tellurite thành Tellurium. Đó là lý do tại sao các thuộc địa điển hình của S. aureus trong môi trường này chúng có màu xám hoặc đen được bao quanh bởi một môi trường màu vàng.

Vi khuẩn phát triển trong môi trường này và không làm giảm manurit hoặc men lên men, sẽ tạo thành các khuẩn lạc trong suốt được bao quanh bởi một môi trường màu đỏ, thậm chí còn mạnh hơn màu gốc, do sự kiềm hóa của môi trường bằng cách sử dụng pepton..

Mặt khác, vi khuẩn làm giảm Tellurite nhưng không lên men mannitol sẽ phát triển thành các khuẩn lạc màu xám hoặc đen được bao quanh bởi một màu đỏ đậm.

Nếu môi trường được điều chế mà không bổ sung kali Tellurite, khuẩn lạc của S. aureus chúng sẽ phát triển thành các khuẩn lạc màu vàng, được bao quanh bởi một môi trường màu vàng, chẳng hạn như trong môi trường thạch mannit mặn.

Cân bằng thẩm thấu và chất hóa rắn

Dipotali phosphate duy trì sự cân bằng thẩm thấu của môi trường và điều chỉnh độ pH thành trung tính 7.2. Trong khi agar mang lại sự nhất quán vững chắc cho môi trường nuôi cấy.

Chuẩn bị

Dung dịch kali Tellurite 1% w / v

Giải pháp này không được bao gồm trong môi trường khử nước, vì nó không thể được khử trùng trong nồi hấp. Vì lý do này, nó được chuẩn bị riêng và thêm vào môi trường tiệt trùng.

Một số nhà thương mại bán dung dịch kali Tellurite 1% sẵn sàng sử dụng. Nếu bạn muốn chuẩn bị trong phòng thí nghiệm, hãy tiến hành như sau:

Cân 1,0 g kali Tellurite và đo 100 ml nước cất. Hòa tan Tellurite của kali trong một phần nước và sau đó hoàn thành lượng nước cho đến khi bạn đạt 100 ml. Khử trùng dung dịch bằng phương pháp lọc.

Môi trường thạch Vogel-Johnson

Cân 60 g môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Hỗn hợp được đun nóng đến sôi để hỗ trợ hòa tan hoàn toàn. Trong quá trình hòa tan, môi trường được khuấy trộn thường xuyên.

Khử trùng trong nồi hấp ở áp suất 15 pound và 121 ° C trong 15 phút. Lấy ra khỏi nồi hấp và để yên cho đến khi môi trường đạt đến nhiệt độ khoảng 45 đến 50 ° C. Thêm 20 ml dung dịch kali Tellurite đã chuẩn bị trước đó vào 1%.

Trộn và đổ vào đĩa petri vô trùng. Cho phép hóa rắn và đặt hàng đảo ngược trong plaquers để lưu trữ sau này trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng.

Độ pH cuối cùng của môi trường chuẩn bị nên ở mức 7,2 ± 0,2.

Trước khi trồng mẫu, đợi cho đến khi tấm lấy nhiệt độ môi trường.

Màu của môi trường chuẩn bị là màu đỏ.

Sử dụng

Mặc dù nó có thể được sử dụng để cách ly S. aureus trong bất kỳ loại mẫu nào, nó chủ yếu được sử dụng để phân tích vi sinh của dược phẩm, mỹ phẩm và thực phẩm.

Đó là khuyến cáo rằng các chủng được dày đặc. Việc gieo hạt có thể được thực hiện bằng cách đánh bằng tay cầm bằng bạch kim hoặc bằng bề mặt bằng thìa Drigalski.

Các tấm được ủ ở 35-37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong aerobiosis.

Kiểm soát chất lượng

Để thực hiện kiểm soát chất lượng môi trường Vogel-Johnson, có thể sử dụng các chủng kiểm soát sau:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus biểu bì ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 hoặc Proteus mirabilis ATCC 43071.

Kết quả dự kiến ​​như sau: đối với các chủng S. aureus Tăng trưởng thỏa đáng với các khuẩn lạc màu đen được bao quanh bởi môi trường màu vàng. Để S. biểu bì tăng trưởng thường xuyên với các khuẩn lạc mờ hoặc đen được bao quanh bởi môi trường đỏ.

Tương tự như vậy, cho E.coli dự kiến ​​sẽ có sự ức chế hoàn toàn, và cho Proteus mirabilis ức chế một phần hoặc toàn bộ; Nếu nó phát triển, nó sẽ làm như vậy một cách tiết kiệm và các thuộc địa sẽ có màu đen được bao quanh bởi một màu đỏ trung bình.

Tài liệu tham khảo

  1. Phòng thí nghiệm BD. VJ (Vogel và Johnson Agar). 2006. Có sẵn tại: bd.com
  2. Phòng thí nghiệm Britania. Vogel- Johnson Agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
  3. Phòng thí nghiệm Britania. Kali Tellurite. 2015. Có sẵn tại: britania.com
  4. Phòng thí nghiệm Hidia. Vogel- Johnson Agar vừa. 2018. Có sẵn tại: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Cơ sở Vogel- Johnson Agar. Hướng dẫn sử dụng vi sinh Merck. Phiên bản thứ 12, trang 502-503. Có sẵn trong: Người dùng / Nhóm / Tải xuống
  6. Những người đóng góp cho Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia để sống bách khoa toàn thư,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Covenin tiêu chuẩn Venezuela 1292-89. (1989). Thức ăn Cách ly và đếm Staphylococcus aureus. Có sẵn trong:sencamer.gob.ve