Peptone nước nền, chuẩn bị và sử dụng

các nước peptonada nó là một môi trường làm giàu chất lỏng không chọn lọc, chủ yếu được sử dụng làm chất pha loãng cho các mẫu thực phẩm hoặc các vật liệu khác. Điều này có nghĩa là từ quan điểm hóa học rất đơn giản, chứa peptone của thịt, natri clorua và nước.

Nó có một giá trị dinh dưỡng nhất định, cho phép làm phong phú mẫu. Nếu có vi khuẩn bị đánh đập, điều này có nghĩa là có khả năng sửa chữa khả năng sống sót. Nó đặc biệt hữu ích trong việc phục hồi vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae.

Trong trường hợp phục hồi Salmonellas, nên sử dụng biến thể nước peptonada đệm; Điều này phục vụ như là một phương tiện làm giàu trước mẫu, trong trường hợp này nó chứa các yếu tố khác như disodium phosphate và dipotosphat phosphate.

Thông thường nước peptonada được điều chế ở pH trung tính, tuy nhiên, có những biến thể khác trong đó cần phải có pH là 8,5 ± 0,2 (kiềm), vì vi khuẩn được phân lập là kiềm, ví dụ như Vibrio cholerae.

Mặt khác, môi trường này có thể được sử dụng làm môi trường cơ bản cho các thử nghiệm lên men carbohydrate.

Chỉ số

• 1 nền tảng
• Chuẩn bị 2
  • 2.1 Chuẩn bị tại nhà (phi thương mại)
  • 2.2 Chuẩn bị sử dụng phương tiện thương mại
  • 2.3 Chuẩn bị cho các thử nghiệm lên men
  • 2.4 Các biến thể khác của nước peptonada
• 3 Sử dụng
  • 3.1 Mẫu phân
  • 3.2 mẫu thực phẩm
• 4 Kiểm soát chất lượng
• 5 hạn chế
• 6 tài liệu tham khảo

Nền tảng

Pepton cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn, đặc biệt là nitơ và axit amin chuỗi ngắn, trong khi natri clorua duy trì cân bằng thẩm thấu.

Ngoài ra, môi trường cho phép phân tán, đồng nhất hóa và sửa chữa các tế bào vi khuẩn đã bị hư hại bởi các quy trình công nghiệp..

Là một chất pha loãng, nó là lý tưởng, thay thế hiệu quả giải pháp sinh lý (SSF) hoặc dung dịch đệm phosphate (PBS).

Sự phát triển của vi khuẩn là hiển nhiên bằng cách quan sát độ đục của nó.

Chuẩn bị

Chuẩn bị tự làm (phi thương mại)

Cân 1 g peptone và 8,5 g natri clorua, hòa tan trong 1 lít nước cất. Độ pH nên được điều chỉnh thành 7,0. Đối với điều này, bạn có thể sử dụng natri N 1 clorua.

Chuẩn bị sử dụng phương tiện thương mại

Cân 15 gr môi trường khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Đồng hóa hỗn hợp. Nếu cần thiết, hỗn hợp được đun sôi trong 1 phút để hỗ trợ hòa tan hoàn toàn. Cho vào lọ 100 ml hoặc trong ống 10 ml khi cần thiết. Nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Để nguội và sử dụng hoặc bảo quản trong tủ lạnh. Độ pH cuối cùng của môi trường là 7,2 ± 0,2.

Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt và chuẩn bị là màu hổ phách nhạt.

Chuẩn bị cho các thử nghiệm lên men

Để chuẩn bị trước - trước khi khử trùng - nên thêm carbohydrate vào nồng độ cuối cùng là 1%, cộng với chỉ số Andrade (axit fuchsin) hoặc đỏ phenol (0,008 g / L). Nên đặt chuông Durham để quan sát sự hình thành khí.

Các biến thể nước peptonada khác

-Peptone nước đệm hoặc đệm

Nó chứa chất thủy phân enzyme casein, natri clorua, kali dihydrogen phosphate và natri hydro phosphate dodecahydrate. Độ pH cuối cùng là 7,0 ± 0,2.

Để chuẩn bị, cân 20 g môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Để yên trong 5 phút. Đun trong 1 phút cho đến khi hòa tan hoàn toàn.

Đổ vào chai phù hợp khi cần thiết. Khử trùng bằng nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

-Nước pepton kiềm

Cân 25 g môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước. Tiến hành như mô tả ở trên. Độ pH dao động từ 8,3 đến 8,7.

Sử dụng

Cấy được thực hiện bằng cách đặt mẫu trực tiếp.

Nó được sử dụng để pha loãng các mẫu, đặc biệt là khi nghi ngờ rằng có thể có vi khuẩn bị hư hỏng. Thông thường độ pha loãng là 1:10 và 1: 100.

Ủ trong 24 giờ trong aerobiosis ở 35-37 ° C.

Mẫu phân

Đối với các mẫu phân tìm Salmonella, nên sử dụng nước đệm hoặc nước đệm làm môi trường làm giàu trước..

Để làm điều này, tiến hành như sau:

Nếu phân được hình thành, lấy 1 g mẫu. Nếu chúng ở dạng lỏng, lấy 1 ml phân và đình chỉ trong một ống có 10 ml nước pepton đệm. Trong trường hợp gạc trực tràng, xả vật liệu chứa trong gạc vào ống bằng nước pepton đệm.

Trong mọi trường hợp, trộn và đồng nhất mẫu rất tốt.

Ủ ở 37 ° C trong 18 đến 24 giờ. Sau đó nuôi cấy phụ trong môi trường làm giàu như nước canh selenite cystine hoặc nước canh tetrathionate ở 37 ° C trong 18-24 giờ. Cuối cùng canh tác trên môi trường chọn lọc đối với Salmonella, như thạch SS, agar XLD, thạch Hektoen, trong số những loại khác.

Mẫu thực phẩm

Nước peptone được sử dụng làm môi trường làm giàu hoặc làm chất pha loãng đơn giản, nhưng nếu các loài Salmonella được tìm kiếm, nó được sử dụng làm môi trường làm giàu trước, như đã mô tả..

Trong thực phẩm tiến hành như sau:

Đối với thực phẩm rắn, cân nặng 25 gr của mẫu và đối với thực phẩm lỏng, đo 25 ml. Đặt phần nói trên vào bình chứa 225 ml nước peptonated. Trộn và đồng nhất mẫu.

Nếu nghi ngờ rằng tải lượng vi sinh vật có độ pha loãng nối tiếp cao hoặc số thập phân có thể được thực hiện để tạo thuận lợi cho việc đếm các đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU).

Số lượng pha loãng sẽ phụ thuộc vào loại mẫu và kinh nghiệm phân tích.

Nếu ngược lại, người ta nghi ngờ rằng tải lượng vi sinh rất thấp, không cần thiết phải pha loãng. Sau đó, subcultivate trong phương tiện chọn lọc.

Trong trường hợp thực phẩm từ biển, như hải sản, cá, trong số những người khác, để tìm kiếm Vibrio cholerae hoặc các loài Vibrio khác, nên sử dụng nước peptone được điều chỉnh đến pH 8,5 (nước peptonated kiềm).

Kiểm soát chất lượng

Từ mỗi mẻ được chuẩn bị, một đến hai ống phải được ủ mà không cần tiêm trong 24 giờ trong aerobiosis ở 37 ° C. Vào cuối thời gian, không nên quan sát độ đục hoặc thay đổi màu sắc.

Ngoài ra, các chủng kiểm soát nổi tiếng có thể được sử dụng để đánh giá hiệu quả của chúng:

Đối với điều này, các chủng vi khuẩn sau đây có thể được sử dụng: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Trong mọi trường hợp, sự phát triển của vi sinh vật thỏa đáng được mong đợi, điều này được quan sát bởi độ đục của môi trường.

Hạn chế

-Môi trường khử nước rất hút ẩm, vì vậy cần tránh xa độ ẩm.

-Không nên sử dụng phương tiện nếu quan sát thấy một số loại hư hỏng.

-Môi trường nuôi cấy mất nước nên được bảo quản trong khoảng 10 - 35 ° C

-Môi trường đã chuẩn bị nên được giữ lạnh (2-8 ° C).

Tài liệu tham khảo

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B và Velázquez O. Kỹ thuật phân tích vi sinh thực phẩm. Năm 2009, tái bản lần 2. Khoa Hóa học, UNAM. Mexico Phiên bản dành cho Quản trị viên Sổ tay và Tài liệu (AMyD) của Khoa Hóa học, UNAM 1. Có sẵn tại: http://depa.fquim.unam.mx
2. Phòng thí nghiệm Britania. Đệm nước peptonada. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
3. Phòng thí nghiệm Neogen Nước peptone. Có sẵn tại: Thực phẩm an toàn.neogen.com
4. Phòng thí nghiệm Britania. Nước peptone. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
5. Phòng thí nghiệm Merck Nước đệm peptone. Có sẵn tại: merckmillipore.com
6. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Nước pepton kiềm. Có sẵn tại: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh của Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana S.A. Argentina.